耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的四环素耐药基因的检测闫国超，张征(河北医科大学第一医院，050031)【摘要】目的：了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌四环素耐药基因的检出情况。方法：收集2007年1月～2008年6月分离自河北医科大学第一医院临床患者的MRSA45株，采用聚合酶链式反应进行四环素耐药基因检测。结果：45株MRSA中有26株检出四环素耐药基因，检出率为57.8％。结论：四环素耐药基因检出率较高，是MRSA对四环素类抗菌药物耐药的重要机制。【关键词】耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；MRSA；四环素耐药基因；tetM基因Researchonthetetracyclinedrug-resistantgeneofMethicillin-resistantStaphylococcusaureusYANGuo-chao,ZHANGZheng(1.TheFristHospitalofHeibeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050031)【ABSTRACT】Objective:Tolearnthetetracyclinedrug-resistantgeneofMethicillin-resistantStaphylococcusaureus(MRSA).Methods:45strainsofMRSAwereclinicallyisolatedfromthepatientsinTheFirstHospitalofHeBeiMedicalUniversityfromJanuary2007toJune2008.Thetetracyclinedrug-resistantgeneweredetectedbypolymerasechainreaction(PCR)methods.Results:Among45strainsofMRSA,therateofpositiveofthedrugresistantgenestetMwere57.8％（26/45）.Conclusion:Theisolatingratesofdrug-resistantgenessuchastetMinMultipledrug-resistanceMRSAwerehigherthan.Itshowedthatdrug-resistantgenesareimportantmechanisminwhichMRSAshoweddrugresistanceofthetetracycline.【Keywords】Methicillin-resistantStaphylococcusaureus;MRSA;thetetracyclinedrug-resistantgene；tetMgene中图分类号：R378.1+1文献标志码：A四环素类抗生素是由放线菌产生的一类广谱抗生素，常规浓度时有抑菌作用，高浓度时呈杀菌作用，该类抗生素对革兰阳性菌尤其是葡萄球菌的抗菌活性较革兰阴性菌高。近年来，随着β-内酰胺类、大环内酯类等抗生素的耐药性增加、新的四环素类抗生素副作用减少，其在临床应用又有增加的趋势。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistantStaphylococcusaureus，MRSA)已为医院感染中常见的重要病原菌[1]，具有多重耐药特征，给临床治疗带来困难。为进一步了解MRSA对四环素类抗菌药物的耐药机制，本研究对45株MRSA进行了四环素耐药相关基因检测，现将结果报告如下：材料与方法1材料1.1菌株45株MRSA为2007年1月~2008年6月分离自河北医科大学第一医院临床患者的痰液、伤口分泌物和脓液等标本，-70℃保存；质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC25923。1.2主要仪器Mastercycler型PCR扩增仪(德国Eppendrof公司)；Bio-Vison-3000型凝胶成像仪（法国VilberLourmat公司）。1.3主要试剂微球菌鉴定卡（湖南天地人生物科技有限公司）；DNA分子量参照物（100bpDNALadder）、琼脂糖、溴化乙锭（上海生物工程技术服务有限公司）；四环素耐药基因tetM试剂盒（无锡市克隆技术研究所）。1.4菌种鉴定：应用微球菌鉴定卡鉴定为金黄色葡萄球菌；应用苯唑西林-盐平板筛选法确认为MRSA。1.5四环素耐药基因tetM检测DNA提取采用蛋白酶K消化法，基因扩增采用聚合酶链式反应法，严格按试剂盒提供的说明书进行操作。PCR产物电泳后，将胶块置于凝胶成像系统下照相并鉴定，出现与阳性对照分子相当的目的条带判断为阳性，tetM产物长度501bp。引物：P1：5′-GTGTGACGAACTTTACCGAA-3′P2：5′-GCTTTGTATCTCCAAGAACAC-3′2结果2.1四环素耐药基因tetM的检出情况45株MRSA的四环素耐药相关基因tetM的检出率为57.8％（26/45）；tetM基因的PCR电泳结果见图1。图1tetM基因的PCR电泳结果(501bp)从左到右依次为：标准分子量，阳性对照，样本1---样本73讨论MRSA对β-内酰胺类、四环素类等多种抗菌药物均有较高的耐药性，且呈多重耐药趋势。四环素类抗生素的抑菌机制为抑制细菌蛋白质合成。四环素进入细胞后，与细菌核蛋白体30S亚基结合，阻止蛋白质合成始动复合物的形成，并抑制氨酰tRNA与mRNA-核蛋白体复合物结合，从而抑制肽链延长和细菌蛋白质的合成。细菌对四环素类抗生素的耐药机制主要有3种：①由质粒或转座子编码的排出因子（Te...