微量微生物法测定血清中司帕沙星浓度摘要目的:建立血清中司帕沙星(SPLX)浓度微生物测定法。方法:采用微量微生物法。选用枯草杆菌、大肠杆菌为实验菌种测定SPLX血药浓度。结果:测得枯草杆菌的回收率为：(98.75～105.50)%，RSD为(1.3～5.4)%；大肠杆菌的回收率为(95.88～104.00)%，RSD为(1.0～6.1)%。结论:用微量微生物法测定SPLX血药浓度，操作简便，成本低廉，样品用量少，精密度高，适用于体内药物浓度监测。关键词司帕沙星；微量微生物法；血药浓度中分类号：R927.2文献标识码：A：1001-5213(2000)05-0268-02DeterminationofsparfloxaininhumanserumbymicrobiologicassayWangLi,WangHongbing,XiaoLing(GezhoubaCentralHospital,HubeiYichang443002)ABSTRACTOBJECTIVE：Toestablishamicrobioligicassayforthedeterminationofsparfloxain(SPLX)concentrationinhumanserum.METHODS：Themicrobiologicassaywasstudied,usingBacillusSubtilisandEschetichiaColiasexperimentalbacteriaforthedeterminationofserumconcentrationofSPLX.RESULTS：TheactualprecisionsofBacillusSubtilismethodwas(1.3～5.4)%,therecoverywas(98.75～105.50)%.TheactualprecisionsofEscherichiaColimethodwas(1.0～6.1)%,therecoverywas(95.0～104.0)%.CONCLUSIONS：ThedeterminationoftheconcentrationofSPLXissimple,cheap,samplesaving,highprecisionbythemicrobiologicassay.ItissuggestedthatthemethodissuitabletodeterminetheserumconcentrationofSPLXinhuman.KEYWORDSsparfloxain;microbiologicassay;serumconcentration司帕沙星(sparfloxain，SPLX)是一种新型的喹诺酮类抗菌药物。据报道，SPLX与同类药物相比，具有血药浓度高、组织分布广、渗透性强、半衰期长等药动学特征。其抗菌谱广，抗菌活性强，耐受性好，不良反应小，临床治疗感染性疾病取得满意效果［1］。但是国内对SPLX的血药浓度检测方法笔者尚未见报道。我们旨在建立一种简单、准确的微量微生物测定方法，以便在临床监测SPLX的血药浓度，指导临床合理用药。1材料1.1实验材料SPLX(中国药科大学提供)；枯草杆菌［CMCC(B)63501］，大肠杆菌［CMCC(B)44102］均由宜昌市药品检验所提供；健康人混合血清由宜昌市血站提供。1.2菌种枯草芽胞杆菌混悬液，大肠杆菌混悬液，Ⅰ号培养基(pH7.8)及菌碟均按中国药典规定方法制备［2］。2方法与结果2.1操作方法在制备好的菌碟上，取直径为3mm角膜环钻在同一碟内隔一定的间距打若干小孔，用微量加样器准确加入标准溶液或样品溶液10μl，置37℃培养箱内培养18h后，用游标卡尺测量抑菌卷直径(D)。2.2标准曲线制作精密称取SPLX适量，加0.1mol.L-1的氢氧化钠适量至恰溶解，加灭菌注射用水稀释成2mg.ml-1的贮备液。取贮备液适量，精密稀释成16μg.ml-1，然后用血清依次稀释成8，6，4，2，1，0.5μg.ml-1浓度，按上法测定，以抑菌圈直径(D)与浓度的对数(lgC)作回归处理。测得枯草杆菌标准曲线方程为：lgC=0.07960D-0.9920，r=0.9995。大肠杆菌标准曲线方程为：lgC=0.06810D-0.7317，r=0.9979。2.3精密度与回收率试验在同日内和不同日间以血清配制与标准溶液浓度相同的样品溶液各5份，如上法操作，每一样品点在同碟内做一条标准曲线。由标准曲线方程计算出样品浓度和回收率。结果见表1，表2。表1SPLX精密度结果(n=5)理论浓度μg.ml-1枯草杆菌大肠肝菌日内日间日内日间RSD%RSD%RSD%RSD%87.90±0.121.57.99±0.202.57.79±0.263.47.74±0.283.666.02±0.142.35.94±0.081.35.77±0.071.25.84±0.193.244.07±0.082.04.09±0.061.53.92±0.071.93.94±0.041.122.11±0.031.52.06±0.062.91.90±0.055.01.92±0.031.711.03±0.065.41.05±0.043.40.97±0.054.91.04±0.043.80.50.49±0.035.80.46±0.025.2注：两种菌种比较差异无显著性(P<0.05)表2SPLX回收率结果(n=5)理论浓度μg.ml-1枯草杆菌大肠杆菌回收率%RSD%回收率%RSD%87.81±0.0897.501.07.67±0.3995.885.144.10±0.07102.501.84.00±0.24100.006.111.03±0.06103.005.51.04±0.02104.002.43讨论实验结果表明，以枯草杆菌为实验菌种所测得的标准曲线相关...