浅议丙肝抗体阳性者血清中HCV—RNA联合检测应用探析摘要：目的：探讨丙肝抗体阳性者血清中HCV-RNA的阳性率，为临床诊断、治疗HCV感染提供依据。方法：采用PCR实时荧光定量法对36例丙肝抗体阳性患者进行丙型肝炎病毒RNA检测。结果：36例丙肝抗体阳性患者中，20例HCV-RNA阳性，阳性率为55.56%O结论：抗-HCV和HCV-RNA的联合检测，对于丙型肝炎的诊断及治疗具有重要的价值及临床意义。关键词：丙型肝炎病毒；抗丙肝病毒抗体；PCR实时荧光定量法【中图分类号】R564【文献标识码】B【文章编号】1672-3783(2012)11-0128-01丙型肝炎病毒(HCV)是一种经血传播的疾病，临床以ELISA法检测的抗-HCV抗体为主，但抗体阳性并不能说明病人携带丙型肝炎病毒，也不能反映其是否具有传染性。为了更好指导临床用药，现就在我院就诊的36例丙肝抗体阳性患者血清进行HCV-RNA检测，现报告如下。1资料与方法1.1对象：自2011年1月〜2012年12月，在我院就诊并经ELISA法检测为抗-HCV抗体阳性的患者标本，采集静脉血5ml,及时分离血清，若不能当日检测冰冻保存。1.2方法及仪器1.2.1检测抗-HCV抗体：试剂由山东潍坊3V生物工程公司提供，仪器选用MK3酶标仪及普朗洗板机，操作严格按标准的操作规程进行，并进行室内质量控制。1.2.2丙型肝炎病毒RNA测定：试剂由中山达安基因有限公司提供，仪器为美国ABI7300实时荧光定量分析仪，采用PCR实时荧光定量法对36例丙肝抗体阳性患者进行丙型肝炎病毒RNA的检测。2结果36例抗-HCV抗体阳性患者中，其中20例HCV-RNA阳性,阳性率为6667%,病毒量为1.0X103-5.0X106IU/mlo3讨论丙型肝炎病毒(HCV)属于黄病毒科，丙型肝炎病毒属,单股正链RNA病毒。HCV感染人体后，有将近一半的人会变为慢性肝炎，并且慢性HCV患者可能发展为肝硬化，并可能导致肝细胞癌。目前认为，对HCV复制活跃的患者，尽早开始抗丙肝病毒治疗可望中止或延缓病变发展，从而改善患者预后。因此，HCV感染的早期诊断显得十分重要和迫切。很多患者感染HCV多年，但在临床上并无明显的症状和体征。对此类患者，HCV感染的病原学检测往往是确定诊断和治疗决策的唯一依据。抗-HCV抗体检测是目前常用的筛查和诊断HCV感染的检测方法。应用ELISA检测抗-HCV存在的一大缺陷是“窗口期”长，约为50d,且存在漏榆现象。这可能与方法学敏感性、病毒感染所处的临床阶段、基因的突变及抗病毒药物的应用相关。而HCV-RNA是丙型肝炎病毒复制最直接、可靠的指标，而PCR实时荧光定量法是目前检测HCV-RNA最佳的手段，定量的准确率极高，可真实反应HCV的复制情况，是完善HCV诊断的重要手段。HCV-RNA在感染一周即可被检出，是HCV感染的直接依据，对丙肝的早期诊断具有重要意义，可以缩短感染后血清阳转前的检测窗口期，以实现HCV感染的早期诊断，只有确诊为血清HCV-RNA阳性的丙型肝炎患者才需要抗病毒治疗。有资料显示，ELISA检测抗-HCV阳性而采用PCR实时荧光定量法检测HCV-RNA阳性的符合率为62.5%,本研究中,36例有20例阳性,为55.56%,与报导相近。抗-HCV阳性、HCV-RNA阴性患者，可能由于以下各种原因造成：1）急性丙型肝炎恢复期HCV被清除后，血清中HCVRNA即消失，而抗-HCV抗体则消失较慢，可继续在一段时间呈阳性。2）慢性丙型肝炎治疗后慢性丙型肝炎经抗病毒治疗，有反应的病例，血清HCVRNA转阴。3）抗-HCV假阳性尽管改进后的第二代和第三代ELISA试剂，特异性与敏感性提高，但仍有一定的假阳性。特别是自身免疫性疾病或高免疫球蛋白血症病人可出现假阳性，如自身免疫性肝炎、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等。4)HCV-RNA假阴性虽然检测HCV-RNA的敏感性很高，但若选用的引物不匹配，或由于丙型肝炎病毒发生变异，以及实验因素等影响，均可造成假阴性。5)HCV-RNA十分脆弱，易被血细胞含有的RNA酶降解。6)HCV-RNA不想HBV-DNA那样不受进食的影响，HCV易与迅速增多的血中脂肪及脂蛋白结合，从而降低检出率,出现假阴性。7)HCV-RNA的PCR包括从RNA到DNA的转录，第一次PCR及第二次PCR,其中任何步骤的问题均影响其检出。综上所诉，丙肝抗体阳性者血清中HCV-RNA的联合检测,及时发现早期感染者，而且能够明确抗-HCV阳性的感染者体内病毒的复制水平，以便确定是否...