嗜酸氧化亚铁硫杆菌丝氨酸乙酰转移酶的表达、纯化及性质鉴定#郑春丽1,2，戴云杰1，马宏伟2，柳建设1**5101520253035（1.东华大学环境学院，上海201620；2.内蒙古科技大学数理与生物工程学院，内蒙古包头014010）摘要：丝氨酸乙酰转移酶（Serineacetyltransferase，SAT）是嗜酸氧化亚铁硫杆菌（Acidithiobacillusferrooxidans，A.ferrooxidans）菌中合成半胱氨酸的关键酶，SAT在乙酰-CoA存在情况下催化L-丝氨酸乙酰化生成O-乙酰丝氨酸（OAS），随即OAS被催化生成L-半胱氨酸。本文以A.ferrooxidansATCC23270标准菌株的基因组为模板,通过PCR扩增得到编码丝氨酸乙酰转移酶的基因，与原核表达载体PLM1构建重组体，转入大肠杆菌（Escherichiacoli，E.coli）DH5α中，测序正确后，加IPTG诱导表达,用一步亲和层析法纯化出了浓度和纯度都较高的丝氨酸乙酰转移酶。由紫外分析和SDS-PAGE确定其分子量为28KDa，并成功测得其活性，比活为8.0×104U/mg。关键词：嗜酸氧化亚铁硫杆菌；丝氨酸乙酰转移酶；cysE；克隆；表达；纯化中图分类号：Q89Expression，Purification,andCharacterizationofaSerineacetyltransferasefromAcidithiobacillusFerrooxidansZHENGChunli1,2,DAIYunjie1,MAHongwei2,LIUJianshe1(1.CollegeofEnvironmentalScienceandEngineering,DonghuaUniversity,ShangHai201620;2.SchoolofMathematics,PhysicsandBiologicalEngineering,InnerMongoliaUniversityofScience&Technology,BaoTou014010)Abstract:Serineacetyltransferaseisakeyenzymeinvolvedinthepathwayofthecysteinebiosynthesis,catalysestheformationofO-acetyl-L-serinefromacetyl-CoAandL-serine,thenOASbecatalysedtoL-cysteine.AccordingtoA.ferrooxidansATCC23270genomeswastemplate,thegenecysEwhichencodesSerineacetyltransferasewascloned,thefragmentwaslinkedintotheprokaryoticexpressionvectorPLM1.ThentherecombinedexpressionplasmidwastransducedintoDH5α.Aftersequencewasmensuratedright,withtheadditionIPTGwasexpressedinEscherichiacoli,thesolubleproteinwaspurifiedbyone-stepaffinitychromatographytoapparenthomogeneity.UV–visscanningresultsoftherecombinantprotein.ThemolecularmassoftheSerineacetyltransferasewas28KDabySDS-PAGE.ThespecificactivityofthepurifiedATPsulfurylasewas8.0×104U/mg.Keywords:Acidithiobacillusferrooxidans;Serineacetyltransferase;CysE;Clone;Expression;Purification0引言A.ferrooxidans是一种典型的化能自养菌，属于革兰氏阴性细菌，好氧嗜酸，广泛存在于土壤、海水、淡水、垃圾、硫磺温泉和沉积硫内，尤以金属硫化矿和煤矿等酸性矿坑水(PH<4)40中[1,2]种。目前已有不少国家应用它提取铜、铀、金等获得工业生产[3-6]，在混合精矿分离和铝土矿脱硅等也有着比较广泛的应用,在环境方面，广泛的应用生物淋滤技术去除并回收污泥或---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---由于能在硫元素和硫化物矿物上生长，因而成为生物湿法冶金中最有应用价值的一个基金项目：中国高等教育博士项目研究基金(20100075110010)；国家自然科学基金(41073060,50874032,51264029)作者简介：郑春丽，女，讲师，环境生物学，生物冶金。通信联系人：柳建设，男，教授，环境生物学，生物冶金。ljscsu@126.com-1----本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---底泥中难溶重金属，去除煤矿和烟气中的硫等[7,8]。硫的代谢是A.ferrooxidans重要的能量代谢，包括硫的氧化与还原。其中无机的硫酸盐被还原和固定到半胱氨酸称为硫的同化途径，4550556065广泛的存在于生命有机体中，如植物、真菌、细菌、海藻等。半胱氨酸具有一个自由的巯基，是蛋白质的结构和功能上重要的氨基酸残基。半胱氨酸的自由硫醇基团涉及二硫键的形成，对一些蛋白的稳定至关重要，也是各种酶，辅助因子和调控蛋白的催化和氧化还原中心。半胱氨酸也是细胞中具有重要的氧化还原缓冲器和解毒功能的谷胱甘肽的限制性营养成分，但是过量的...