文章编号:1001-6910(200810-0009-03・实验研究・针药结合对脑缺血再灌注大鼠血清SOD、MDA及海马组织超微结构的影响3成泽东,陈以国,王树东(辽宁中医药大学,辽宁沈阳110032摘要目的:观察脑缺血再灌注大鼠海马组织超微结构的改变及血清中SOD、MDA含量,研究针刺联合川芎嗪注射液对脑缺血再灌注大鼠的疗效及原理。方法:采用MCAO法制作脑缺血再灌注大鼠模型,透射电镜观察海马区神经元超微结构的改变,生化比色法检测血清中SOD、MDA含量。结果:针药结合组海马组织神经元的恢复较其他组有明显改善,血清中SOD的含量显著升高,MDA含量显著降低,优于单纯川芎嗪和针刺组。结论:针药结合能有效升高血清中SOD的含量,降低MDA含量,从而减少神经元的损伤,其作用优于单一疗法。关键词:脑缺血针药并用血清SOD血清MDA海马区神经元超微结构中图分类号:R28515文献标志码:B1材料与方法1.1动物清洁级Wistar大鼠60只,雌雄各半,体质量(200±20g,由中国医科大学实验动物中心提供,许可证号:SCXK(辽200320009。1.2药物与主要试剂盐酸川芎嗪注射液,郑州卓峰制药厂产品,批号为国药准字H20055479;2.5%戊二醛,由辽宁中医药大学电镜实验室提供;SOD、MDA,均购于南京建成生物工程研究所,批号依次为20070506,20070110。DY892II电动玻璃匀浆剂,宁波新芝生物科技股份有限公司提供。1.3仪器DY892Ⅱ电动玻璃匀浆机,宁波新芝生物科技股份有限公司提供;LKB型超薄切片机,瑞典LKB公司产品;JEM2100CXⅡ透射电镜,日本电子公司产品;MDF2291AT型-70℃冰箱,日本三洋电子株式会社产品;TDL252A型Anke离心机,上海安亭科学仪器厂产品;BIO2RAD550酶标仪,产地美国;8052A电针仪,广东省汕头市医用设备厂产品;华佗牌针灸针,规格0.35mm×25mm,苏州医疗用品厂有限公司产品。1.4动物分组Wistar大鼠正常饲养1w,实验前和实验过程中均自由饮水和摄食。采用随机对照方法分为对照组(A、脑梗死组(B、药物组(C、针灸组(D、针药结合组(E,每组10只。1.5动物模型的建立参照ZeaLonga,Nagasawa的改良方法制作大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO脑缺血模型[1]。10%水合氯醛(330mg/kg腹腔麻醉,消毒颈部皮肤,沿颈正中线做一长度约2cm的切口,仔细分离暴露出右侧颈总动脉(CCA、颈外动脉(ECA和颈内动脉(ICA,分别以丝线打活结,并以止血钳牵拉。结扎右侧颈总动脉(CCA、颈外动脉(ECA后,在接近颈总动脉分叉处用眼科剪剪一小口,用420单股尼龙鱼线,一端烧成球面,做成尼龙鱼线栓。将尼龙鱼线从颈总动脉至颈内动脉(ICA插入大脑中动脉遇阻即止,进线长度(19±1mm,栓塞右侧大脑中动脉。插线成功后,结扎颈内动脉(ICA以固定尼龙线,消毒并缝合切口(注意留在外面的尼龙鱼线,防止脱落。栓塞2h后,缓缓拔出尼龙鱼线进行脑缺血再灌注。1.6治疗方法在脑缺血再灌注后3h、12h后,药物组、针药结合组注射盐酸川芎嗪注射液,剂量为50mg/kg;针灸组、针药结合组根据华兴邦等研制的《大鼠穴位图谱》针刺百会、风府两穴,并连接电针仪(波型为疏密波,频率2Hz,电压1~3V,以大鼠肢体微颤为宜,每次电针10min。1.7指标检测1.7.1血清中SOD、MDA含量的检测脑缺血后24h取材,腹主动脉采取新鲜血液,匀浆、离心后分离血清,SOD、MDA试剂盒检测各组血清中SOD、MDA的含量。1.7.2海马神经细胞和神经胶质细胞的超微结构观察脑缺血后24h取材,生理盐水心脏灌流后,断头取脑,牙签轻轻剥离大脑皮质,找到海马组织,立即在B、C、D、E组病灶区及A组非病灶位对应处切取1mm3大小脑组织各3块,投入4℃4%多聚甲醛固定,PBS漂洗(4℃,1%锇酸固定2h(4,℃丙酮浓度梯度脱水后,环氧树脂EPon812浸透,包埋,制作LKB超薄切片,JEM2100CXⅡ透射电镜观察神经细胞的超微结构变化。・9・中医研究2008年10月第21卷第10期TCMRes.October2008Vol.21No.101.8统计学方法实验数据用均数±标准差(珋x±s表示,采用SPSS13.0软件进行统计分析。组间均数比较用方差分析,q检验,以P<0.05为差别有统计学意义。2结果2.1各组SOD、MDA含量的比较见表1。表1各组SOD、MDA含量的比较(珋x±s组别例数SOD(μ/mLMDA(nmol/mL对照组1031.018±1.863034.2462±0.994933模型组1026.464±2.69966.4163±0.42986药物组1030.742±1.811135.5690±0.592813针灸组1029.494±3.794335.7999±0.470263...