一颅锁骨发育不全综合征家族的RUNX2基因分析研究[摘要]目的检测一个颅锁骨发育不全综合征（d）家系runx2基因突变情况。方法采用先证者查证法，对d家系各成员进行全身健康状况及口腔专科检查，拍摄x线片；抽取先证者及其父母、姐姐外周静脉血，提取基因组dna，聚合酶链反应（pcr）扩增runx2基因并测序，将先证者及其父母、姐姐runx2基因测序结果进行blastn比较分析。结果在先证者runx2基因的外显子2上发现了一个c→t突变，此突变母系染色体该基因568位点的基因突变；密码子cgg→tgg引起runx2编码的转录因子第190位保守的精氨酸变成色氨酸，突变型为c.568c>t。结论c.568c>t突变是导致该家系发病的分子基础。[关键词]颅锁骨发育不全综合征；runx2；基因突变[]r781.6[文献标志码]a[doi]10.7518/hxkq.xx.05.019颅锁骨发育不全综合征（cleidocranialdyspla-sia，d）是一种累及骨骼和牙齿的常染色体显性遗传性疾病[1]，具有明显的家族聚集性，男女发病率无明显差别，临床发病率约为1：1000000。d常见的临床症状有囟门闭合延迟或不闭合，颅骨缝增宽，锁骨钙化不良、缺失或部分缺失，锥形胸，耻骨联合增宽而致骨盆发育不良，身材矮小等；口腔表现常见上颌骨发育不足，有多生牙，乳牙滞留，恒牙萌出延迟或埋伏牙等症状[2-5]。目前d的发病机制尚不清楚，本研究采用分子生物学的方法对1个颅锁骨发育不全家系的患者进行runx2基因测序分析研究。1材料和方法1.1研究对象d家系1个，山东省济南市，家系图见图1。先证者，女，29岁，xx年6月因“牙齿不齐，咀嚼困难”到济南市口腔医院修复科就诊，要求修复上下牙列缺损。采用先证者查证法，对家系各成员进行全身健康状况及口腔专科检查。查体：先证者反，混合牙列，恒牙仅16、17、26、27、36、37、46萌出，全部乳牙均滞留，11～15、21～25、31～35、41～45未萌，65、71、72、73、75、81、82、83、85松动ⅱ度；颅骨和面部比例失调，头大面小，前额及顶部突出呈方形，前囟门未闭合，从额部到枕部中线区有明显凹陷；面中部发育不足，凹面型，眶距增宽；上颌骨及颧骨发育不足，下颌骨发育相对正常；肩部窄小，胸部呈圆锥形，锁骨短小，仅在近胸骨处可扪及，双肩下垂并可在胸前并拢。x线（图2）检查：上下颌骨内有埋伏牙，滞留乳牙牙根未见明显吸收，前囟门未闭合，颅缝增宽，并见多块缝间骨，双侧肩胛骨较小，呈翼状，位置下垂，双侧锁骨肩峰端部分缺如，耻骨联合间隙增宽，骶髂关节轻度增宽。先证者及其母亲的临床表现和x线特征均符合d特征。该家系中3代共15位成员，其中d患者2例：先证者及其母亲，其母亲自述先证者姥姥、姥爷和其兄弟姐妹无类似症状。箭头所指为先证者，ⅰ～ⅳ代表代数。图1患者家族谱系图fig1thepedigreeoftheinvolvedfamily1.2基因组dna提取及测序ⅱⅲ1.2.1dna提取抽取先证者及其父母、姐姐外周静脉血各2ml，放入干冰冻存，使用universalge-nomicdnaextractionkit试剂盒进行dna提取，取1μl进行琼脂糖凝胶电泳，获得基因组dna。1.2.2聚合酶链反应（polymerasechainreaction，pcr）扩增参照文献[6]的方法设计7对寡核苷酸引物（表1），然后对runx2基因分别使用takaralataq?、takaramightyampdnapolymerase?进行套式pcr扩增，反应体系及方法按照说明书进行。1.2.3基因测序及突变位点分析使用takaraaga-rosegeldnapurificationkit切胶回收目的片段进行测序，测序由宝生物工程（大连）有限公司完成，并对测序结果进行blastn比较分析。2结果将先证者的runx2基因测序结果进行blastn比较分析，在exon2上发现了一个c→t突变，实际测序图谱显示双峰结构（c、t）；对于其d母亲的基因检测结果表明，此突变母系染色体该基因568位点的基因突变；密码子cgg→tgg可能引起runx2编码的转录因子第190位（r190w）保守的精氨酸变成色氨酸。该突变型为c.568c>t，cgg>tgg。先证者的父亲、姐姐的测序结果显示，在同一位点显示c的单峰，即与blastn中健康人的序列相同（图3）。3讨论目前的研究表明，颅锁骨发育不全的致病基因是runx2，该基因定位于染色体6p21[7-8]，基因的错意表达、基因插入、缺失或者移码突变等都是造成颅锁骨发育不全综合征的重要原因[9]。锁...