可溶性的meClpsl蛋白的原核表达和辅脂酶功能检测#廉滋珍1，薛樱子1,2，曹佐武1，陈冉1,2，陈雷3，蔡冬青1,2，谢琪璇1,2，齐绪峰1,2，510152025303540肖銮娟1，禹艳红1,2**（1.暨南大学生命科学技术学院发育与再生生物学系，广州510632；2.暨南大学再生医学教育部重点实验室，广州510632；3.暨南大学附属第一医院麻醉科，广州510632）摘要：目的：确定小鼠附睾特异蛋白meClpsl（mouseepididymalcolipase-like）是否具备辅脂酶活性。方法：构建了融合表达载体pET32b-meClpsl，并通过原核表达和亲和纯化制备了可溶性的meClpsl蛋白，辅脂酶试剂盒检测其是否具有辅酯酶功能。结果：成功构建重组表达载体pET32b-meClpsl，在原核表达系统成功重组表达meClpsl蛋白，且目的蛋白主要以可溶蛋白形式存在。辅脂酶试剂盒检测meClpsl不能促进脂酶对底物甘油三酯的水解作用。结论：meClpsl蛋白不具有胰辅脂酶的功能。关键词：meClpsl；融合蛋白；原核表达；辅脂酶中图分类号：Q786ProkaryoticexpressionandcolipaseactivityidentificationofmeClpslLianZizhen1,XueYingzi1,2,CaoZuowu1,ChenRan1,2,ChenLei3,CaiDongqing1,2,XieQixuan1,2,QiXufeng1,2,XiaoLuanjuan1,YanYanhong1,2(1.DepartmentofDevelopmentalandRegenerativeBiology,CollegeofLifeScienceandTechnology,JinanUniversity,GuangZhou510632;2.KeyLaboratoryforRegenerativeMedicine,MinistryofEducation,JinanUniversity,GuangZhou510632;3.FirstAffiliatedHospital,JinanUniversity,GuangZhou510632)Abstract:Objective:ToexpressmeClpslwithprokaryoticsystem,verifywhetherithascolipaseactivityornot.Methods:ThemeClpslgenewasinsertedintotheprokaryoticexpressionvectorpET32b,afterinducedbyIPTG，therecomibinantmeClpsproteinwasexpressedinducedbyIPTGandpurifiedwithaffinitychromatography.ThecolipasekitwasusedtodetectwhetherthemeClpshasthecolipaseactivity.Result:ThefusionmeClpslproteinwassoluble,butcouldnotpromotethehydrolysisoflipasetoitssubstrateglycerinetrioleate,similarasthenegativecontrolprotein.Conclusion:ItrevealedthatmeClpslproteinhadnoeffectonpancreaticlipase,andmaynotpossessthecolipasefunction.Keywords:meClpsl;fusionprotein;prokaryoticexpression;colipase0引言附睾不仅是精子的通道，还是精子成熟和贮存的部位，在雄性哺乳动物生殖中发挥重要作用[1]。精子离开睾丸进入附睾后，获得运动能力、顶体功能的完善、代谢类型的转变、精卵的识别和融合等功能[2]，精子的成熟有赖于一些附睾特异基因在时间和区域上的特异表达[3]特异表达的新基因[4,5]，首先由Oh等[4]通过UniGene数据库检索发现，并对其mRNA的附基金项目：中央高校基本科研业务费专项资金资助（21610202），广东省优秀博士论文资助项目---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---。小鼠附睾类辅脂酶（mouseepididymalcolipase-like，meClpsl）基因是一个附睾头部组织（sybzzxm201033），国家自然科学基金（30930232）作者简介：廉滋珍，（1987-），女，硕士研究生，配子发生与胚胎发育。通信联系人：禹艳红，（1979-），女，副研究员，发育生物学与再生医学。E-mail:yuyhong79@gmail.com-1----本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---睾表达特异性进行了验证。中科院上海生化所张永莲院士等在人附睾cDNA文库中也发现了一个辅脂酶家族成员的新基因（con32），与meClpsl的蛋白同源性为53.6%[6]。与meClpsl4550类似，也具有高度的附睾特异性和区域性。meClpsl作为一个类辅脂酶蛋白，与胰辅脂酶具有最高的相似性，但其相似性也仅23-26%，而且meClpsl蛋白含有11个半胱氨酸残基，较典型的辅脂酶家族成员多了1个半胱氨酸残基。因此meClpsl是否具有胰辅脂酶类似的功能，尚不清楚。在前期研究中，我们表达制备的meClpsl蛋白主要以包涵体形式存在，且包涵体蛋白变复性效果并不理想[5]，为此本实验在此通过融合表达系统在体外制备meClpsl可溶蛋白，并对...