丹参作用后人肾小管上皮细胞蛋白质组双向电泳技术的建1了魏聪1张春燕2肖斌2邵军2（通讯作者）（1泸州医学院附属屮医医院检验科四川泸州646000）（2泸州医学院生物化学教研室四川泸州646000）【摘要】目的：建立丹参作用后人肾小管上皮细胞蛋白质组双向电泳分离体系，提高其分辨率和重复性。方法：丹参作用于人肾小管上皮细胞，提取全蛋白，按标准条件对蛋0质进行双向电泳分离，并对各个关键因素进行了优化。结果:最终选择的裂解液配方是1%TBP,4%CHAPS,0.2%Bio-Lyte,40mmol/LTris,8mol/L尿素，2mol/L硫脲；使用pH4〜7的IPG胶条，电泳参数根据Bio-Rad公司的预设方案进行调整；改良硝酸银法进行蛋0质斑点染色。从而获得了满意的蛋白质组双向电泳图谱。结论：成功建立了丹参作用后人肾小管上皮细胞蛋白质组双向电泳分离体系，具有较高的分辨率和重复性，为进一步较为系统、全面、准确的评价丹参及其复方制剂的作用机制和药效提供方法学基础。【关键词】双向电泳蛋白质组丹参人肾小管上皮细胞【中图分类号】R319【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）01-0097-02EstablishmentofTwo-dimensionalElectrophoresisSystemforProteomesfromsalviaemiltiorrhizaetreatedHumanKidneyTubularEpithelialCellsWEIChongl,ZHANGChun_yan2,XIAOBin2,SHAOJun2（lClinicalLabofTraditionalChineseMedicineHospital,2DepartmentofBiochemistry,LuzhouMedicalCollege,Luzhou,Sichuan,646000,China,e-mail:zcy_2004_116@163.com）【Abstract】Objective:Thisstudyaimedtoestablishasystemoftwo-dimensionalgelelectrophoresis(2-DE)forseparationofproteomesfromHumanKidneyTubularEpithelialCells.Methods:AftertheculturedHK-2cellsweretreatedbysalviaemiltiorrhizae，theproteinswereextracted,andseparatedby2-DEinstandardconditionswithanoptimizationforeachimportantexperimentalparameter.Results:Thelysisbuffercontainingl%TBP,4%CHAPS,0.2%Bio-Lyte,40mmol/LTris,8mol/Lurea,2mol/Lthioureawasappliedtoextractproteinsfromcells.ThepassiverehydrationschemeofsampleswasusedtohelptheseparationoflargemolecularweightproteinsintheIPGgel.ElectrophoresisparametersrecommendedbyBio-RadCorporationwereadjustedadequately.Intheprocessofsilverstaining,asufficientwashingoperationensuredaweekbackgroundof2-DEmaps.Conclusions:Underaboveoptimizedconditions,2-DEmapswithhighresolutionhavebeenreproduciblyobtained.Thereforea2-DEseparationsystemforproteomesfromHK-2cellshasbeensuccessfullyestablished.【Keywords】Two-dimensionalgelelectrophoresisProteomesalviaemiltiorrhizaeHumanKidneyTubularEpithelialCell现代生命科学技术的发展推动了农业现代化前进的步伐。蛋白质组学作为后基因组时代研宄的核心内容之一，其研宄技术己滲入到农业领域。蛋白质组(proteome)是指由一个细胞的基因组所表达的全部相应的蛋白质。蛋白质组学(proteomics)是对蛋白质的表达方式、功能及相互作用的全面研究；或是对一种细胞、组织或生物体内蛋白质特征的全面探索及描述［1-2］。而双向电泳(two-dimensionalelectrophoresis,2-DE)作为蛋白质组研究的三大核心技术之一，是目前分离复杂蛋白质组分最常用的工具。由于肾小管上皮细胞对缺血缺氧高度敏感，所以在肾缺血再灌注损伤(renalischemiareperfusioninjury,RIRI)中最早出现损伤的部位便是肾小管，因此临床上患者肾功能的恢复主要取决于肾小管上皮细胞损伤与修复过程动态平衡的最终结果［3】。丹参，又名紫丹参，为唇形科植物丹参(salviaemiltiorrhizae)的干燥根及根茎，主产于四川、安徽、江苏、河南、山西等地。近年来研究发现丹参提取物对RIRI具有保护作用［4-5］，但具体机制不甚明了。本实验旨在建立丹参作用后人肾小管上皮细胞蛋白质组的双向电泳分离体系，以进一步探讨丹参对细胞的药理作用，了解其对细胞、组织器官或生物体的综合作用，以期为全面准确地评价丹参及苏复方制剂的分子机制和药效作用提供有力的技术保障。1材料...