淋巴结阴性乳腺癌组织中CD8+T细胞的浸润与临床意义摘要：目的：探讨淋巴结阴性乳腺癌患者组织中CD8+T的浸润与其预后的关系。方法：通过采用免疫组化染色法我们测定了332例平均生存期为152个月的淋巴结阴性乳腺癌患者乳腺癌组织中CD8+T细胞的浸润情况，然后分别采用Kaplan-Meier生存分析、单因素COX分析和多因素COX分析计算患者的无病生存时间（diseasefreesurvival，DFS）、总生存时间（overallsurvival，OS）和CD8+T细胞的统计学相关性。结果：285例（85.8%）患者显示出CD8+T细胞的强阳性浸润状态。单因素COX分析表明CD+T细胞和患者的有着显著的统计学相关性。在Kaplan-Meier生存分析中，呈阳性CD8+T细胞浸润状态的患者有着更长的DFS和OS。多因素COX分析中也表明CD8+T细胞是独立的预后判断因子，与患者的DFS、OS有着显著的统计学相关性。结论：以CD8+T细胞代表的细胞免疫系统有着良好的抗肿瘤效应，这种对患者生存的保护性作用可作为一种新型的免疫治疗手段改善乳腺癌患者的预后。关键词：CD8阳性T细胞；乳腺癌；保护性免疫标记物乳腺癌是世界范围内发生于女性中最常见、最致命的恶性肿瘤。虽然近年来通过早期诊断和多重疗法使得乳腺癌患者的预后有了改善，但评价期预后的方法仍然较为局限，因此目前迫切的需要能对其早期评价且筛选出能受益于高选择性的靶向治疗的预后标记物[1]。通过基因表达检测，近段时间来一些免疫细胞相关的基因标记物被发现也是判断乳腺癌患者生存的良好预后判断因子[2]。目前为止很多实验证实了在直肠癌、肺癌、食管癌、卵巢癌、肾透明细胞癌和胰腺癌患者中，CD8+T细胞的阳性浸润与这些患者更长的生存时间密切相关[5-10]。本次实验的目的是通过免疫组化染色396例乳腺癌标本中浸润于癌巢和癌组织间质中的CD8+T细胞，统计学分析其与患者DFS和OS之间的相关性。1.材料与方法1.1一般资料本实验包括1990年至2003年岳阳市二医院普外科396例术前未做任何治疗的淋巴结阴性乳腺癌患者肿瘤组织标本。肿瘤分期为T1期至T3期，且在手术时无远处转移。每一例患者都有完整的相关随访资料。通过筛选，在这396例标本中，215（54.3%）例患者接受了经典根治术和放疗，181（45.7%）例患者接受了乳腺癌改良根治术。所有患者诊断时的年龄：33～89岁，平均年龄：（58.3±2.4）岁。有332例患者的经过福尔马林固定、石蜡包埋乳腺癌组织标本可用来进行免疫组化实验。平均随访时间为152个月，在此期间，53（15.6%）例患者死于乳腺癌复发、转移，46（13.6%）例患者死于与乳腺癌不相关的其他疾病，7（2.1%）例患者死亡原因不明，233例（68.7%）仍然生存，90（26.5%）例患者发生肿瘤的局部复发。进行统计学分析时我们剔除了死于其他原因的乳腺癌患者。1.2方法根据以前文献报道的免疫组化染色标准法[3]，我们对厚度为4？m的乳腺癌组织进行了免疫组化染色。福尔马林固定、石蜡包埋的乳腺癌组织依次浸泡于不同浓度梯度的酒精和二甲苯，置于PH10的柠檬酸盐缓冲液中并加热25分钟以行抗原修复，3%过氧化氢溶液在室温下反应5分钟，1：50稀释的单克隆CD8抗体在室温下反应60分钟，二抗在室温下反应30分钟，与DAB溶液在室温下反应5分钟，与苏木精溶液染色5分钟，盖玻片后将切片置于奥林帕斯显微镜下由本文中两位受过组织免疫组化诊断培训且不知所有标本临床病理情况的进行观察评价。所有实验都包含阳性（扁桃体）和阴性对照（未加一抗），所有的对照都显示出适当的实验结果。1.3结果评价CD8+T细胞呈棕褐色细胞膜染。根据以往文献的报道[4]，我们评价了乳腺癌组织癌巢和癌间质中CD8+T细胞的浸润强度，简而言之，癌巢CD8+T细胞指浸润于乳腺癌细胞之间或与癌细胞直接接触的CD8+T细胞，癌间质CD8+T细胞指浸润于癌巢之外间质中不与癌细胞直接接触的CD8+T细胞。我们采用了一种半定量评分法评价CD8+T细胞的浸润强度：0，无CD8+T细胞浸润；1+，CD8+T细胞的弱阳性浸润；2+，CD8+T细胞的中等阳性浸润；3+，CD8+T细胞的强阳性浸润。如两位评价者对某一染色标本的评价结果不一致，切片会被重新评价讨论直到达成共识。1.4统计学分析Kaplan-Meier法计算乳腺癌患者生存率。患者无病生存时间（DFS）定义为乳腺癌确诊...