产前诊断的方法杨国安王宏坤葛华陈鹏(内蒙古包头医学院第一附属医院中心实验室014010)【中图分类号】R714【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)33-0078-02【摘要】目的探讨FISH技术在产前诊断中的应用前景。方法应用国产探针(CSP18/CSPX/CSPY探针组和GLP13/GLP21探针组)对50例羊水中的细胞进行检测，从而判断胎儿13、18、21、X和Y染色体的数目有无异常，同时与50例羊水染色体培养结果进行对比。结果严格按照实验流程操作，50例羊水的FISH均检测成功，与胎儿羊水染色体核型分析的结果相比较，准确率为100%。但部分FISH检测结果中出现少量带有异常杂交信号的核。结论FISH技术相比羊水培养具有时间周期短，准确率高等特点，具有重耍的应用价值,但并不能完全取代羊水培养在产前诊断中的作用。【关键词】荧光原位杂交产前诊断羊水[Abstract]ObjectiveTostudyapplicationoffluorescenceinsituhybridization(FISH)technologyinprenataldiagnosis・MethodsApplyingnationalprobe(probegroupCSP18/CSPX/CSPYandprobegroupGLP13/GLP21)todetectfiftyanrnioticfluidcells,thendecidingwhetherthenumbersofchromosomal13,18,21,X,Yarenorma.1,andcomparingwithconsequenceoffiftyamnioticfluidcellculture・ResultsAccordingtoexperimentflow-sheetstrictly,fiftFISHdetectsaresuccessful,anditsaccuracyrateis100%comparedwithconsequenceoffiftyamnioticfluidchromosomalkaryotypeanalysis・ButpartofFISHdetectsappearedfewhybridizationsignal.ConclusionFISHtechnologyhasafewfeaturesincludingshorttimecycleandhighaccuracyratecomparedwithamnioticfluidculture・AlthoughFISHhasimportantapplicationvalue,itcant?ttotallydisplaceeffectofmnioticfluidcultureinprenataldiagnosis・[Keywords]fluorescenceinsituhybridizationprenataldiagnosisamnioticfluid我国计划生育政策执行30多年來，人口数量得到了显著控制，目前的计生工作重点已经从单纯的控制人口数量转变到提高人口素质。产前诊断作为出工缺陷干预的重点内容近年來发展迅速。目前针对胎儿的产前诊断主要采用羊水培养观察染色体数目及形态结构的异常，这种方法能够准确诊断胎儿的染色体病，但此类方法技术含量高，得到诊断结果所需的吋间长。因此临床要求更便捷、准确、快速的诊断方法便应运而生了。染色体荧光原位杂交（FISH）技术不仅可用于中期分裂相，还可在间期细胞显示杂交信号，因此，可以用于未培养的细胞，能很快得出诊断结果[1-3]o本文介绍了FISH技术在产前诊断中的应用。1资料与方法1.1研究对象选择2008年5月-2010年10月在我院和内蒙古妇幼保健医院妇产科就诊的唐氏筛查高危孕妇50例，年龄26-45岁，平均年龄32.04岁；孕周14-20周，平均孕周18.4周。全部为唐氏筛查检测高危。高龄（235岁）孕妇12例。孕中期妇女先进行唐氏综合症筛查实验，筛查高危结果的孕妇建议进行羊水采集平行作羊水细胞培养和FISII检测。用22号腰穿针行羊膜腔穿刺抽取羊水30ml分成两份,10ml用于FISH检测，20ml用于羊水染色体培养[4]。1.2所用仪器、试剂所用仪器包括奥林巴斯BX51型荧光显微镜，FISII图像分析系统，37£二氧化碳培养箱等。试剂为国产荧光原位杂交探针试剂盒由北京金菩嘉医疗科技有限公司提供。1.3FISH检测采集到的羊水立即进行样本玻片制备及预处理，接着进行样木制备及变性，同时准备探针混合物并变性，然后使探针与样木杂交,最后玻片洗涤后进行结果观察。采集到的羊水立即离心后取上清，加固定液固定后用细胞混悬液滴片，在室温下老化过夜。老化后的破片在室温下于0.IMHCL溶液中浸泡玻片7—10分钟；前后均用2XSSC(PH7.0)溶液中漂洗玻片2次，每次5分钟；经酒精梯度洗脱，在于74°C,70%的甲酰胺/2XSSC中变性，洗脱，干燥后致46C烤片机预热。将装有探针混合物的试管置于73±1°C水浴箱中变性5分钟，将10u1变性后的探针混合物滴于玻片杂交区域，立即加盖盖玻片，用树脂胶封片，将玻片置于预热的湿盒中，42°C保温箱中过夜杂交。移去盖玻片，立即将玻片置于盛有50%甲酰胺/2XSSC溶液瓶中，洗涤玻片3次；将玻片先后置于盛有2X...