四川椭圆叶花锚愈伤组织的诱导作者：覃筱燕，杨林，邵丽勉，刘盛林【摘要】目的探讨不同培养条件及不同的外殖体对椭圆叶花锚愈伤组织诱导的影响。方法以椭圆叶花锚种子培养的无菌苗的茎和新鲜植株的茎段为外殖体，MS为基本培养基，分别以6-BA和NAA两种植物激素为变量进行实验研究。结果MS培养基+1.0mg/L6-BA+1.0mg/LNAA对诱导椭圆叶花锚愈伤组织的形成效果最佳；高浓度的6-BA配合较高浓度的NAA诱导的愈伤组织致密，出愈率高。结论不同培养条件对椭圆叶花锚愈伤组织的诱导有不同的影响，其中以无菌苗的茎段为外殖体易形成愈伤组织。【关键词】外殖体；愈伤组织；椭圆叶花锚Abstract：ObjectiveToresearchtheeffectsofdifferentcultureanddifferentexophyteonthecallusofHaleniaellipticaD.Don.MethodsWiththestemofsterileseedlingandfreshplantsasexophyte,MSasabasicmedium,6-BAandNAAhormonewereadoptedastheexperimentalvariables.ResultsMS+1.0mg/L6-BA+1.0mg/LNAAinducedthebesteffectofcallus;higherconcentrationsof6-BAwithhighconcentrationsofNAAmadecallusdensificationandhigherrate.ConclusionDifferentplanthormonesandtheirdifferentconcentrationratioshavedifferenteffectsonthecallusofHaleniaellipticaD.Donandadventitiousbuds.KeywordsExophtye;Callus;HaleniaellipticaD.Don椭圆叶花锚，又名黑及草，藏语称“去合斗拉果玛”，蒙名为希赫日-地格达，是一年生或两年生草本植物，为龙胆科(Gentianaceae)花锚属(HaleniaBorkh)植物，主要分布于我国的西藏、青海、四川、甘肃等地，生于海拔2500～4400m的林下或草原［1～3］。椭圆叶花锚性味苦寒，全草入药，为藏蒙药系统中治疗肝胆系统疾病的常用药物。现代医学验证其对治疗肝炎有显著疗效［4～8］。以花锚为主药材研制、开发的治疗肝胆系统疾病的成品藏药，具有疗效稳定、有效率高等特点，市场前景广阔。随着我国藏药事业的迅速发展，椭圆叶花锚的药用资源需求量快速增加。由于过度采挖，导致其野生植物资源日益枯竭。为了该药物资源的可持续利用，我们实验室进行了椭圆叶花锚的组织培养技术实验，探讨不同植物生长激素对于椭圆叶花锚愈伤组织的诱导和芽长势的影响，找出适宜于实验室植株再生的培养条件，为大田实验提供优质种苗，从而为椭圆叶花锚规模化生产提供新途径。1材料与方法1.1材料实验材料椭圆叶花锚的种子和新鲜植株（见图1，鉴定人：西昌学院刘建林副教授）采自四川省美姑县大风顶自然保护区，海拔在3500m左右。1.2材料的处理挑选颗粒饱满的椭圆叶花锚种子，低温层级处理7d后用温水（﹤15℃）浸泡30min，12%双氧水（H2O2）消毒8min，无菌水冲洗3次后，放置于超净台上待用。1.3无菌苗的获得在无菌条件下，将已表面消毒后种子接种于无激素的MS培养基上，7～10d后，种子萌发，待其长到5～6cm，将无菌苗(图2)的根和茎分别剪（或切）成1cm左右的块段，待用。1.4新鲜植株的处理将野生的椭圆叶花锚植株洗净并将老叶去掉，剪（或切）成1cm左右的带有腋芽的茎段和洗净的根段，在超净台上先将其用75%的酒精灭菌30s然后再用0.1%升汞灭菌10min，最后用无菌水冲洗3～5遍,放置待用。1.5愈伤组织的诱导将无菌苗的根、茎块段和新鲜植株带有腋芽的茎段和洗净的根段在无菌的条件下以适当深度放入不同的培养基中，每瓶2～3块。放置于恒温培养箱中，培养温度为（20～25）℃，光照时间12h·d-1。光照强度为35～40μmol·m-2·s-1。1.6培养基的配制以MS为基本培养基，添加不同浓度的6-BA和NAA，配制成8种培养基。将培养基的pH值调至5.8左右,高压灭菌20min后装入150ml的锥形瓶中，每瓶约30ml。1.7统计方法形成愈伤组织的外植体上指形成了肉眼可见的愈伤组织的外植体，愈伤组织形成频率(%)＝形成愈伤组织的外植体/接种的未污染的外植体数100%，所有数据均于外植体接种1个月后统计。2结果2.1不同外植体对椭圆叶花锚愈伤组织形成的影响2.1.1不同的外植体不同的外植体在相同的实验条件下，对愈伤组织形成有不同的影响。实验中发现以新鲜植株带有腋芽的块段和洗净的根为外植体没有形成愈伤组织，分析其主要原因可能为新鲜的植株虽...