RP-HPLC法测定注射用去甲斑蝥酸钠的含量及有关物质斑蝥酸钠维生素b6注射撰写时间：202X年XX月XX日摘要目的:建立高效液相色谱法测定注射用去甲斑蝥酸钠的含量及有关物质。方法:色谱柱为ODS-C18柱（4.6×2mm,5μm），流动相为乙腈-0.01molL-1磷酸二氢铵溶液（8:92，磷酸调节pH3.1），检测波长为211nm。结果:去甲斑蝥酸素浓度在0.25～4.0mgmL范围内线性关系良好，r=0.9997，两种制剂规格的平均回收率为分别为99.48%和99.63%,RSD分别为0.62%和0.44%。结论:该方法结果准确，适用于注射用去甲斑蝥酸钠的质量控制。关键词注射用去甲斑蝥酸钠；含量测定；有关物质中图分类号R485文献标识码B文章编号15-0515(2021)06-0413-02去甲斑蝥酸钠是一种抗肿瘤药物，由去甲斑蝥素与氢氧化钠反应制得。去甲斑蝥酸钠临床用于肝癌、食管癌、肺癌等的书签用药或联合用药，能够干扰癌细胞的分裂，抑制癌细胞DNA合成，但对正常骨髓细胞不抑制，并能升高白细胞1。在去甲斑蝥酸钠注射液的国家标准中2，采用在外分光光度法进行含量测定，以去甲斑蝥素为对照品。注射用去甲斑蝥素尚无国家标准，本文则采用RP-HPLC法对注射用去甲斑蝥酸钠的含量及有关物质进行了测定。1仪器与试药日立L202x高效液相色谱仪；注射用去甲斑蝥酸钠（自制，规格：10mg/支）；去甲斑蝥素对照品；磷酸二氢铵（分析纯，天津市博迪化工有限公司）；乙腈（天津康科德化工有限公司）；磷酸（分析纯，天津市博迪化工有限公司）。2方法与结果2.1色谱条件:通过酸、碱、氧化、热、光破坏试验，确定一下色谱条件，在该条件下，所有降解产物色谱峰与主成分色谱峰分离度良好。色谱柱：ODS-C18柱（4.6×2mm，5μm）；流动相为乙腈-0.01molL-1磷酸二氢铵溶液（8:92，磷酸调节pH3.1），检测波长：211nm；流速：1.0mLmin-1；柱温为35℃，进样量为20μL。2.2专属性考察:①取流动相20μL注入液相色谱仪，结果表明流动相不干扰有关物质的检查。②取辅料适量，加流动相适量使溶解，摇匀，滤过；取滤液20μL注入液相色谱仪，结果表明辅料无干扰。2.3定量限:取去甲斑蝥素浓度为1.0mgmL-1的对照品溶液1mL，加水稀释至1mL，进样20μL测定，确定定量限为2.1μg。2.4标准曲线的绘制：对照品溶液：取去甲斑蝥素对照品约50mg,精密称定，置10mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取对照品溶液适量置10mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，配制成含去甲斑蝥素对照品0.25，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0mgmL的溶液，分别精密量取20μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，绘制标准曲线，得回归方程A=474766C，r=0.9997。去甲斑蝥素质量浓度在0.25～4.0mgmL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.5精密度试验:为考察方法的精密度，取同一份去甲斑蝥素浓度为1.0mgmL的对照品溶液20μL，重复进样6次，测得峰面积的RSD为0.18%。2.6稳定性试验：取去甲斑蝥素浓度为1.0mgmL的对照品溶液，室温放置，分别于0，2，4，6，8，10h取20μL进样，测得峰面积的RSD为0.71%，说明溶液室温放置在10h内稳定。2.7回收率试验：按处方量的80%，1%和120%进行回收率试验。分别取去甲斑蝥素对照品适量（约80，1，120mg），精密称定，然后按处方比例加入辅料，加流动相稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件测定，计算回收率。结果表明低、中、高三种浓度的回收率（n=3）分别为1.3%，99.4%和99.2%，平均回收率（n=9）为99.63%，RSD为0.62%。说明选取的高效液相色谱法准确度良好。2.8含量测定：取自制样品，倾出内容物，精密称定（约相当于去甲斑蝥素10mg），置10mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取对照品约10mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别去上述溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，结果表明三批样品的含量分别为101.7%，101.7%，101.8%。2.9有关物质测定:2.9.1测定方法:取装量差异项下的本品适量，精密称定（相当于去甲斑蝥素20mg）于10mL量瓶中,加流动相稀释制成每1mL中约含去甲斑蝥素2mg的溶液作为供试品溶液；精密量取...