卡拉胶污染菌株的分离与鉴定邹信，冉艳红，王伟**（暨南大学生命科学技术学院）510152025303540摘要：本文从变质卡拉胶中分离得到八株菌，将它们加入甲基红指示剂到以卡拉胶为唯一碳源的培养基中，发现其中一株细菌和三株霉菌能够引起卡拉胶降解，霉菌#2和细菌#5分解卡拉胶产酸能力较强。将#2和#5菌接种以不同浓度卡拉胶为唯一碳源的液体培养基中，通过测定发酵液粘度，证实#2和#5菌株均有较强的降解卡拉胶的能力。最后对细菌#5进行形态、生理生化和16SrDNA测序鉴定，鉴定其属于微杆菌属Microbacteriumsp.。关键词：卡拉胶；裂解；微生物分离；微生物鉴定中图分类号：Q939.9IsolationandidentificationofabacteriumfromdeterioratedcarrageenanZOUXin,RANYanhong,WANGWei(Lifesciencecollege,JinanUnoversity)Abstract:Inthisstudy,8microorganismswereisolatedfromthedeterioratedcarrageenan,afterbeingaddedintomediumwithmethylredindicatorandcarrageenanastheonlycarbonsource,itwasfoundthatonebacteriaandthreefungusarecapableofdegradingcarrageenan,whilemildew#2andbacteria#5havestrongercapability.Inaddition,theviscosityofthemediumwithdifferentconcentrationofcarrageenanastheonlycarbonsourcefermentedwithmildew#2andbacteria#5showedthattheyarecompetentincarrageenandegradation.Afterthedeterminationofitsmorphological,physiologicalandchemotaxonomiccharacteristics,plus16SrDNAsequenceidentification,#5wasidentifiedasMicrobacteriumsp..Keywords:carrageenase;degradation;microbiologicalseperation;microbiologicalidentification0引言卡拉胶是一种硫酸线性多糖，由1,3-β-D-吡喃半乳糖和1,4-α-D-吡喃半乳糖作为基本骨架交替连接而成[1]，由于糖苷键和硫酸酯键的位置不同分成β-卡拉胶、γ-卡拉胶、κ-卡拉胶等几种[2;3]。不同的卡拉胶具有不同的凝固性和表面活性，可用于凝固剂黏合剂、稳定剂、乳化剂、悬浮剂等，广泛用于食品工业。卡拉胶还具有独特的生理活性，可刺激结缔组织和骨胶原的生长，在抗病毒、抗凝血和免疫方面也有作用，特别是其降解产物硫脂多糖的药理作用更为优良[4;5]。卡拉胶作为一种海产多糖，很少被陆地微生物降解[6]。但是在生产卡拉胶的工厂中，确实存在卡拉胶变质的问题，卡拉胶由白色粉末状变质成为棕色的胶泥状固体。企业急需防治卡拉胶污染的方法。本研究的目的是分离、筛选得到可以降解卡拉胶的微生物，并对它进行进一步的生理生化和16SrDNA鉴定，来确定它的属。从而为制备卡拉胶药用降解产物或其他海藻多糖分解物，为制备分解卡拉胶的酶和研究酶以及微生物对有机大分子的降解机理提供依据和方法。作者简介：邹信，(1988年-)，女，硕士研究生，主要研究方向：多糖降解酶的功能性质通信联系人：冉艳红（1975年-），女，副教授，研究方向：1）基因工程菌的代谢调控。2）微生物多糖与蛋白纯化及稳定性研究。3）多糖降解酶功能性质的研究.tranyh@jnu.edu.cn-1-1材料与方法1.11.1.1材料菌源卡拉胶生产厂变质的卡拉胶样品。455055606570751.1.2培养基原桃胶和卡拉胶由厂家提供。分离用：醋酸菌培养基：葡萄糖500g，酵母粉10g，碳酸钙20g，琼脂13g，蒸馏水1000mL，pH6.8。玉米培养基：玉米粉65g，蒸馏水1000mL。CaCO3明胶麦芽汁培养基：麦芽汁1000mL，水1000mL，CaCO310g,明胶10g，pH6.8。MRS琼脂培养基：蛋白胨10g，牛肉膏5g，酵母膏4g，葡萄糖20g，吐温-801.08g，磷酸氢二钾（K2HPO4）2g，乙酸钠5g，柠檬酸三铵2g，硫酸镁（MgSO4.7H2O）0.2g，硫酸锰（MnSO4.4H2O）0.05g，琼脂15g，pH6.2±0.2。营养琼脂：营养肉汤培养基18g（蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g），琼脂15g，水1000mL，pH7.2~7.4。马铃薯培养基：马铃薯200g，蔗糖20g，水1000mL。真菌培养基：磷酸氢二钾（K2HPO4）1g,硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.5g,蛋白胨5g，葡萄糖10g，孟加拉红33.4mg，水1000mL，使用时加链霉素（终浓度3μg/mL）。筛选用：甲基红卡拉胶培养基：甲基红0.1g，卡拉胶40g，营养肉汤10g，水1000mL纯卡拉胶培养基：卡拉胶5~20g，水1000mL。生理...