肿瘤学专业毕业论文[精品论文]淫羊藿素通过抑制脂肪酸合成酶活性诱导肿瘤细胞凋亡和生长抑制关键词：淫羊藿素乳腺癌脂肪酸合成酶细胞凋亡人表皮生长因子受体-2上皮生长因子受体摘要：研究背景：淫羊藿苷(icariin，ICA，一种黄酮醇糖苷)分子量为676，是箭叶淫羊藿的主要成分。淫羊藿素(icaritin，ICT)分子量为368，是ICA的3种代谢产物之一，也属于黄酮类化合物。已有多项实验表明，黄酮类化合物，如茶叶中表没食子儿茶素没食子酸酯、毛地黄黄酮、栎皮黄酮、山奈酚等，均具有抑制肿瘤生长的作用。虽然有关淫羊藿苷抗肿瘤活性的研究已有较多报道，但目前对淫羊藿素与肿瘤关系的研究仅局限于其通过拟雌激素样作用促进雌激素受体阳性癌细胞增殖。在对上述黄酮类化合物的研究中发现它们具有一个共同的作用靶点--脂肪酸合成酶(fattyacidsynthase，FAS)。FAS是1994年Kuhajda等[1]发现的一种癌基因抗原-519，是脂肪酸合成的关键酶，其终产物为软脂酸(palmiticacid，PA)。后者作为组成细胞膜脂的基础物质，其含量的多寡直接影响着细胞增殖的速度。在正常情况下，FAS除在肝脏中高表达参与脂类物质的合成外，在其他人体组织中含量很低。肿瘤细胞FAS表达增高顺应了肿瘤细胞无限生长的特性，为肿瘤细胞的生长增殖提供了原料[2]。人表皮生长因子受体-2(humanepidermalgrowthfactorreceptor-2，HER2)是肿瘤细胞过表达的另一个基因。HER2为酪氨酸激酶受体，属于erbB家族，与上皮生长因子受体(epithelialgrowthfactorreceptor，EGFR)非常相似，参与调节细胞的生长与分化[3]。HER2在多种肿瘤细胞中都有表达，HER2过表达可使肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性，并与肿瘤患者的预后不良有关。近来的研究发现[4]，FAS和HER2在某些癌细胞中有同时过表达的现象。不论是对FAS进行药物抑制还是基因沉默都可抑制HER2表达，而HER2过表达也可使FAS表达增高，表明FAS和HER2之间具有双向调节的机制。本课题致力于挖掘淫羊藿素作为传统中草药活性分子单体的新的药用价值，研究淫羊藿素抑制肿瘤细胞生长，促进肿瘤细胞凋亡的作用及其分子机制，初步评价淫羊藿素作为抗肿瘤药物的应用潜能。主要研究内容包括：(1)淫羊藿素诱导肿瘤细胞凋亡和生长抑制的实验；(2)淫羊藿素诱导肿瘤细胞凋亡和生长抑制的分子机制研究。研究方法：一、淫羊藿素诱导肿瘤细胞凋亡和生长抑制的实验我们的预试验结果显示，微量淫羊藿素对雌激素受体阳性细胞具有生长刺激作用，但较高浓度的淫羊藿素可诱导雌激素受体阴性肿瘤细胞凋亡，而诱导雌激素受体阳性肿瘤细胞凋亡的敏感性则较差。在对多个细胞株筛选试验后，本文选择具有代表性的雌激素受体阴性肿瘤细胞株SK-Br-3乳腺癌细胞和LnCap前列腺癌细胞(均高表达FAS和HER2)，以及MCF-10a正常乳腺细胞作为靶细胞。首先通过四氮唑蓝细胞活力测定法(MTT)对经淫羊藿素处理的SK-Br-3乳腺癌细胞、LnCap前列腺癌细胞以及MCF-10a正常乳腺细胞进行细胞生长抑制检测。以浓度梯度淫羊藿素处理细胞72hr，未处理细胞作为参照，明确淫羊藿素能否有效抑制SK-Br-3细胞和LnCap细胞生长，以及对正常细胞是否具有细胞毒性作用。同时通过流式细胞仪检测淫羊藿素是否促进SK-Br-3细胞凋亡，即sub-G1期细胞数量是否增加。在48hr时观察不同浓度作用下SK-Br-3细胞的细胞形态，进一步评价淫羊藿素的细胞毒性作用。二、淫羊藿素诱导肿瘤细胞凋亡和生长抑制的分子机制研究本部分实验的主要目的是明确淫羊藿素肿瘤细胞毒性的作用靶点及其影响的信号通路。在以往的研究中，FAS被认为是黄酮类化合物抗肿瘤活性的一个靶点，然而将这一靶点与FAS/HER2信号通路联系起来的研究还未见报道。本实验首先检验外源软脂酸对淫羊藿素的细胞毒性是否具有逆转作用。软脂酸作为FAS的直接产物，当酶活性受到抑制时，其产量下降，进而影响细胞增殖。如在培养基中加入一定量的软脂酸，理论上可以完全弥补这一缺失。在淫羊藿素给药前，将SK-Br-3细胞与软脂酸共同孵育，随后加入淫羊藿素，观察软脂酸对淫羊藿素细胞毒性作用的影响。在随后的淫羊藿素抑制FAS活性的试验中，将提取于SK-Br-3细胞的蛋白提取液与半数抑制浓度的淫羊藿素孵育10min，与反应液混...