径1cm形创面，伤后14天创面上皮化后给药，每只兔左他克莫司抑制兔耳瘢痕增生作用及其机制探究［摘要］目的：他克莫司是临床广泛应用的一种药物，其对增生性瘢痕是否产生作用并无相关报道，为此提出并证实了他克莫司可以抑制兔耳瘢痕增生。方法：建立兔耳增生性瘢痕模型，选10只新西兰大耳白兔双耳腹侧用打孔器制作直增生，可作为临床上治疗及预防瘢痕增生的全新疗法。r—耳为空白对照组涂等剂量凡士林软膏，右耳为他克莫司治疗组。分别在伤后14天、21天、28天、35天和49天采集标本，行HE染色，观察形态学差异；Real-timePCR检测纤维化相关因子TGF-pKTGF-P2.Collagen-a1等的表达。结果：HE染色可见他克莫司组成纤维细胞数量及胶原纤维较对照组明显减少，PCR结果可见TGF-P1.TGF-P2及Collagen-a1表达较对照组在各时间点均减少。结论：实验组较对照组瘢痕明显减轻，证明他克莫司显著抑制兔耳瘢痕［关键词］瘢痕免疫；他克莫司；兔耳模型；增生性瘢痕［中图分类号］R619+.6［文献标识码］A［文章编#11008-6455(2011)01-0068-03TacrolimusinhibitscarformationinrabbitearhypertrophicscarmodelZENGHai-feng,HANXiao-xia,LIUBei丄UKai-hua,GUOShu-zhong,XIAWei(InstituteofPlasticSurgery,XijingHospital,TheFourthMilitaryMedicalUniversity,Xi,an710032,Shaanxi,China)Abstract:ObjectiveTacrolimuswaswidlyusedtoinhibitrejectionofallograftandtherapyforvariouscutaneousdiseases;however,thereisnoreportaboutitseffectiononhypertrophicscar.MethodslONewZealandWhiterabbitswererandomlydividedintotwogroupswitheachearcreatedfourwoundsuse1cmdiameterpunchbiopsyatstandardisedlocationsontheventralsurface.Therightearwoundsweretakedbytacrolimusointment0.1gperwoundtwicedailystartedonday14postwounding,theleftearsweretreatedwithvaselineatthesametime・Experimentalandcontrolwoundswereharvestedondays14,21,28,35and49postwounding,examinedhistologicallytoquantifyscarelevationindex(SEI).Hematoxylin-eosinstainingwasperformedtorevealdifferencesinscarmorphology.Real-timePCRwasadoptedtomeasurethevariationtendencyoftheTGF-pi,TGF-p2andCollagen-a1.ResultsSEIwassignificantlyreducedaftertacrolimustreatedversustheappliedofVaseline(P1.3.2标本采集：术后第14、21.2&35及49天每个时间点空气栓塞法随机处死2只兔子，分别沿创面边缘0.5cm处环行切开，切取含创面的兔耳组织，取材后的兔子即退出实验。每个标本沿直径切开，分为两半，其中一半即刻以4%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋，垂直于创面瘢痕最凸起处纵行切片，每张切片厚度为5pm,行苏木素■伊红染色(HE)染色；另一¥-80°C冰箱保存备用。1.3.3计算瘢痕指数(Scarelevationindex,SEI):光镜下观察HE染色切片，用测微尺测出瘢痕最高点至耳软骨表面的垂直距离取值为a,瘢痕周围正常皮肤至耳软骨表面的垂直距离取值为b,使用公式SEI=a/b,计算出瘢痕增生指数。1.3.4Real-timePCR检测：如表1所示设计合成引物，Tm值均设定为609。按标本顺序分别切取80mg瘢痕组织，提取总RNA,分光光度计测定RNA浓度，纯化并反转录为cDNA,扩增并检测产物片段大小，-2CTC保存。收集所有标本后行Real-timePCR检测纤维化相关因子TGF-p1.TGF-P2及Collagen-a1表达及变化。1.4统计学分析：实验结果均以均数士标准差（x士s）表示，应用SPSS11.5软件进行t检验处理数据，P
