吕熹等：紫外、亚硝酸钠诱变筛选高产耐有机溶剂脂肪酶菌株1紫外、亚硝酸钠诱变筛选高产耐有机溶剂脂肪酶菌株*吕熹，王刚，李俊，王海娟，陈光**吉林农业大学生命科学学院，长春130118摘要：以蜡状芽孢杆菌SW06为出发菌株，通过紫外诱变筛选得到突变株BZ-3，其产脂肪酶的活力较SW06提高2.49倍。再对BZ-3进行亚硝酸钠诱变，得到突变株BF-3，产脂肪酶活力较SW06提高4.11倍。将BF-3传到第5代，其产酶较稳定。关键词：蜡状芽孢杆菌；脂肪酶；紫外诱变；亚硝酸钠诱变：Q814文献标识码：A：1000-5684(2010)04-0394-04网络出版日期：DOI:ScreeningofOrganicSolventTolerantLypase-ProducingStrainsMutatedbyUVandNaNO2LVXi，WANGGang，LIJun，WANGHai-juan，CHENGuangCollegeofLife-Science,激linAgricultureuniversity，Changchun130118，ChinaAbstract：TheoriginalstrainsBacilluscereusSW06weremutatedbyUV,thenthenewstrainBZ-3wasscreenedandtheirlypaseproductivityimproved2.49thanbefore.AnothernewstrainsBF-3werescreenedafterthestrainsBZ-3mutatedbyNaNO2,improved4.07thantheoriginalstrainsSW06.WhentheBF-3waspropagatedtothefifthgeneration,theirlypaseproductivitywerestable.Keywords：Bacilluscereus;lypase;UVmutagenesis;NaNO2mutagenesis吉林农业大学学2010，32(4)：394~397xuebao.jlau.eduJournalof激linAgriculturalUniversityE-mail:jlndxb@vip.sina吕熹等：紫外、亚硝酸钠诱变筛选高产耐有机溶剂脂肪酶菌株2脂肪酶(EC3.1.1.3)是一类特殊的酰基水解酶，能在油水界面上催化酯水解或醇解、酯合成、酯交换、内酯合成、多肽合成、高聚物合成以及制备手性药物等有机合成反应，它可将甘油三酯分解成脂肪酸和甘油或进行其逆反应[1],在工业生产中有着广泛的应用。与水相催化相比，酶在有机相中的催化反应有许多优点，已成为20世纪80年代以来酶工程学研究的新领域。脂肪酶以其广、催化功能多、稳定性好和底物特异性多样化而成为这一新领域的研究热点[2]。目前，脂肪酶被广泛的应用于药物合成、环境治理、食品工业、肽合成、高分子合成等方面。马来西亚的ChinJohnHun[3]成功筛选出耐有机溶剂的脂肪酶生产菌，并且最高的有机耐受量达到70%。Faizal[4]等把活性污泥样本加入到以甲苯作为唯一碳源的矿物盐类基本培养基上富集培养，从中分离得到了PseudomonasputidaT-57菌株，该菌株可利用丁醇、甲苯、苯乙烯、二甲苯、乙苯、己烷和丙苯作为生长底物，能够在甲苯和矿物盐类含量10%～90%的培养基上生长，并能忍受logP高于2.5的有机溶剂。Kyung-Su[5]等也分，得到了耐苯菌株RhodococcusopacusB-4。本试验以蜡状芽孢杆菌SW06为出发菌株，经紫外-亚硝酸钠复合诱变，筛选出一株高产脂肪酶的突变株。吕熹等：紫外、亚硝酸钠诱变筛选高产耐有机溶剂脂肪酶菌株3*基金项目：高等学校博士学科点专项科研基金（20092223110001）作者简介：吕熹，男，硕士研究生，研究方向：酶工程与发酵工程。收稿日期：2009-12-21修回日期：2010-03-13**通讯作者吕熹等：紫外、亚硝酸钠诱变筛选高产耐有机溶剂脂肪酶菌株3951材料与方法1.1试验材料1.1.1原始菌株蜡状芽孢杆菌（Bacilluscereus）SW06由吉林农业大学生命科学学院生物工程实验室保存。1.1.2培养基斜面培养基：酵母膏0.5%，蛋白胨1%，橄榄油0.1%，NaCl0.5%，琼脂2%，pH7.0，121°C高压蒸汽灭菌20min。选择培养基：酵母膏0.5%，蛋白胨0.5%，NaCl0.5%，琼脂20%，橄榄油乳化液（将4g聚乙烯醇加热溶于100ml的蒸馏水中，之后与橄榄油以体积比为3：1的比例混合，超声搅拌乳化120s）12%，pH7.0，121°C高压蒸汽灭菌20min。种子培养基：蛋白胨1%，葡萄糖1%，酵母浸粉0.2%，121°C高压蒸汽灭菌20min。发酵培养基：酵母膏0.5%，NaCl0.25%，MgSO4·7H2O0.1%，橄榄油0.3%，甲苯20%，pH7.0，121°C高压蒸汽灭菌20min。1.2实验主要仪器及试剂PB-10型数字酸度计（德国赛多利斯股份公司），SIGMA3K18低温高速离心机（美国SIGMA公司），78-1恒温磁力搅拌器（金坛市富华仪器有限公司），MJ-16085-Ⅱ培养箱（上海新苗医疗器械制造有限公司），HYG-Ⅱa回转式恒温调...