基因打靶与RNA干扰技术在丝状真菌基因功能组学研究中的应用生物技术通报技术与方法ＢＩｏＴＥｃＨＮｏＬｏＧＹＢＵＬＬＥＴｌＮ２０１１年第５期基因打靶与ＲＮＡ干扰技术在丝状真菌基因功能组学研究中的应用冀颖李梅蒋细良（中国农业科学院植物保护研究所农业部生物防治重点开放实验室，北京ｌＯ００８１）摘要：随着丝状真茵模式生物基因组测序工作的进行，其提供的大量未知功能的基因序列，为研究丝状真菌的基因功能开辟了新的方向，并已成为生命科学领域研究的热点。对基因功能研究中最新的两种方法——基因打靶和ＲＮＡｉ技术的原理、技术路线和特点以及应用情况进行综述。关键词：功能基因组学基因打靶ＲＮＡｉ融合ＰＣＲＡＴＭＴＡｐｐＩｉｃａｔｉｏｎｏｆＧｅｎｅＴａｒｇｅｔｉｎｇａｎｄＲＮＡｉｉｎＦｕｎｇｕｓＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＧｅｎｏｍｉｃｓＪｉＹｉｎｇＬｉＭｅｉＪｉａｎｇ_ｉｌｉａｎｇ（Ｊ何￡以６０ｒｄ细可加ｒＢ如如ｇ如口ＺｃＤｎｆｒｏｚ矿肘ｉ厅厶１７），矿Ａｇｒ记Ⅱｚ‘ｕ形，，瑚‘ｉｌｕｌｅｏ，Ｐｚ口眦ＪＰｒｏｆｅｃ￡ｆｏｎ，Ｄ，ＡＪｇｒ如Ⅱ如ⅡｍｆＳｃ诂，ｌｃｅ，曰ｅ彬ｎｇｌ０００８１）ｃ矗ｉ，ｌｅ５ｅ＾ｃ口ｄｋ，７ｖＡｂｓｔ隐ｃｔ：ｗｈｉｃｈｉｎｉｔｉａｔｅｓＷｉｔｈｔｈｅｃｏｍｐｌｅｔｉｏｎｏｆａｇｅｎｏｍｅ８ｅｑｕｅｎｃｉｎｇｏｆｔｈｅｍｏｄｅｌｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓｆｕｎｇｉ，ｉｔｐｒｏｖｉｄｅｓ１０ｔｓｏｆｕｎｋｎｏｗｎｇｅｎｏｍｉｃｓｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓａｎｅｗａｒｅａｏｆｓｔｕｄｙｉｎｇｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎ８ｏｆｔｈｅ８ｅｇｅｎｅｓ．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｈａｓｂｅｃｏｍｅｈｏｔｔｏｐｉｃｏｆｌｉｆ音ｓｃｉｅｎｃｅ．Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ，ｔｅｃｈｎｉｃａｌＩＤｕｔｅ，ｆ色ａｔｕｒｅｓａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｌａｔｅｓｔｍｅｔｈｏｄ８Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｏｎｔａｒｇｅｔｉｎｇａｎｄＲＮＡｉｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｗｈｉｃｈｉｓｒｅ８ｅａｒｃｈｇｅｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｗａｓｒｅＶｉｅｗｅｄ．ＣｅｎｅｔａｒｇｅｔｉｎｇＲＮＡｉＦｕｓｉｏｎＰＣＲＡＴＭＴＦｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｏｍｉｃｓ随着大量丝状真菌基因序列信息的测定，以基因功能鉴定为目标的功能基因组学已经成为目前生命科学领域研究的热点。转基因、基因打靶和ＲＮＡ干扰等反向遗传学技术是系统地分析基因的功能、基因间的相互作用、基因组的时空表达以及发现和寻找新的功能基因的有效方法。其中基因打靶、ＲＮＡ干扰技术能够有效和特异性地抑制目标基因的表达，操作简单易行，故在基因功能研究中应用十分广泛。构已知功能未知的基因，从分子水平设计试验，将该基因去除或者用其他序列相似的基因取代，从而定点突变靶基因，最后从整体观察目标生物，推测相应基因的功能。１．１基因打靶技术的原理此技术主要是应用同源重组（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｒｅ．ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，ＨＲ）原理，将转染的ＤＮＡ与细胞内的靶基因进行同源交换，以改变靶序列，从而研究其结构与功能或者进行基因治疗。应用此技术可以在分子水平上将目标基因进行定向修饰包括基因灭活、引入点突变、缺失突变和插入外源片段等，并将修饰后的遗传信息在生物体内表达，从而通过表型的变１基因打靶技术基因打靶技术是２０世纪８０年代末发展起来的一种新型的研究基因功能的技术。它是指对一个结收稿日期：２０１０．Ｉｌ—１８基金项目：国家自然科学基金项目（３０６７１４００），国家支撑项目（２００６ＡＤ０８Ａ０２），国家高技术研究发展计划（２００６ＡＡｌ０Ａ２１１），中国农业科学院植物保护研究所基本科研业务费专项（２０ｌＯ－１５），植物病害生物学国家重点实验室开放基金（ＳＫＬ２０１００Ｐ１７）作者简介：冀颖，女，硕士研究生，研究方向：微生物学；Ｅ—ｍａｉｌ：ｊｉｎｇｌ９８６０３１９＠１２６．ｃｏｍ通讯作者：蒋细良，男，研究员。Ｅ—ｍａｉｌ：_Ｕｉａｎｇ＠ｃＭ８．ｎ...