人类mtDNAD-loop区位点变异对基因表达的影响#龚丽景1,3，胡扬1，李燕春1，梅涛2**51015（1.北京体育大学科学研究中心，北京100084；2.北京体育大学运动人体科学，北京100084；3.北京体育大学研究生院，北京100084）摘要：的：研究人线粒体基因（mtDNA）D-Loop区mt235、514-515、16183、16290和16319位点变异对基因表达的影响。方法：采用全基因组合成方法合成包含上述位点序列，分别连接到pGL3-promoter载体上。重组质粒转染至293T细胞，分别观察携带5对mtDNA质粒对双荧光素酶报告基因的表达活性及荧光素酶mRNA表达水平的影响。结果：携带mt235A、mt514-515CA、mt16183A和mt16319G的载体基因表达量显著高于mt235G、mt514-515（Del）、mt16183C和mt16319A（p<0.01）。携带mt16290和mt16319位点的质粒对报告基因的表达没有明显影响，mt16319A质粒下调报告基因的表达，携带mt16290位点的两种质粒对报告基因的相对活性没有差异。结论：本研究中mt235、mt514-515、16183位点变异可以影响基因表达，频率高的的基因型上调基因转录和表达，而mt16290和16319位点变异对基因表达没有影响。关键词：基因多态性；线粒体基因；基因表达；D-Loop区；质粒转染：G820TheeffectofgeneexpressionoflocimutationofhumanmitochondrialDNAD-loopregionGONGLi激ng1,3,HUYang1,LIYanchun1,MEITao2(1.SportScienceResearchCentreofBei激ngSportUniversity,Bei激ng100084;253035402.SportScienceCollegeofBei激ngSportUniversity,Bei激ng100084;3.GraduateSchoolofBei激ngSportUniversity,Bei激ng100084)Abstract:AIM:Thegeneexpressiondifferencesbetweenvariantsofmt235,514-515,16183,16290and16319inhumanmtDNAD-Loopregionwerestudied.METHODS:Thegenesequencescontainedabovelociweresynthesisedrespectively,andthenconstructedwithpGL3-promotervector.Thevectorsweretransfectedinto293Tcells,andtheexpressionactivityandmRNAofthereportergeneintherecombinantexpressionvectorswithdifferentallelesweredetectedbyadual-luciferasereporterassaysystemandRT-PCR.RESULTS:HigherrelativeluciferaseactivitiesandmRNAlevelsweredetectedsignificantlyinvectorscontainingmt235A,mt514-515CA,mt16183Aandmt16319Gthanmt235G,mt514-515(Del),mt16183Candmt16319A(p<0.01).Therewerenoeffectforreportergeneexpressioninvectorscontainingmt16290andmt16319,andwoulddownloadedthegeneexpressionwhichvectorcontainedmt16319A.CONCLUSION:Thevariationofmt235A,mt514-515CAandmt16183Acanup-regulatethegeneexpressioninthisstudy,maybeaffectingthegenefunction.Keywords:genepolymorphisms;mitochondrialDNA;geneexpression;D-Loopregion;plasmidtransfection0引言线粒体DNA(MitochondrialDNA，mtDNA)是真核生物核基因组之外的遗传物质，编码着大约22个转移RNA（tRNAs)，大小2个核糖体RNA（rRNA)和哺乳动物线粒体呼吸---本文于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---基金项目：国家自然科学基金（31071032）作者简介：龚丽景，（1981-），女，实验师，运动员基因选材。通信联系人：胡扬，（1958-），男，教授，运动员基因选材、低氧训练。hyyr1@163-1----本文于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---45链中的13种疏水性蛋白质多肽[1]，在能量转换、细胞代谢等生理过程中发挥了至关重要的作用。因动物体内85%的能量产生于线粒体，线粒体的生物合成对耐力运动类型评分和运动成绩有着密切联系，并且mtDNA类型对耐力型运动员比力量型运动员的运动能力影响更大[2,3]的变化并有可能导致细胞功能的改变[4-8]。MtDNA的非编码区包含D-Loop区，它的功能在50556065于调控mtDNA的转录和复制[8]。本课题组前期通过对优秀耐力运动员和普通人的mtDNAD-Loop区的5个位点多态性的研究，发现这些位点多态与优秀运动员的有氧耐力相关联(结果未发表)。为进一步研究这些位点变异是否会影响下游基因表达，本研究通过双荧光素酶报告基因检测方法，分别检测mt235A/G、5...