多重等位基因PCR技术对中国人5种常见β-地中海贫血突变的快速产前诊断【摘要】目的对中国人常见的CD71-72、CD41-42、CD17→0、IVS-Ⅱ-654C→T和-28A→G等5种β-地中海贫血突变类型进行多重等位基因特异性PCR（MASPCR）技术检测，以证实该方法的可靠性和准确性。方法利用针对野生型及突变性β-珠蛋白等位基因的特异引物，应用单管MASPCR技术对我国常见的5种β-地中海贫血点突变类型进行产前分子检测。结果在被检测的8个家庭共24例受试者中，有17例表现为携带至少一种突变类型的杂合子。其中胎儿有1例为β-地中海贫血双重杂合子，5例为杂合子，2例正常。经分娩或流产后基因分析验证，所有结果均与产前诊断一致。结论MASPCR技术适合于检测β-地中海贫血已知点突变类型，是一种简便、可靠、经济的产前基因诊断方法，具有广阔的优生科学应用前景。【关键词】地中海贫血产前诊断聚合酶链式反应［ABSTRACT］ObjectiveTodetectfivecommontypesofβ-thalassemiamutations［(CD71-72(+A),CD41-42(-4bp),CD17→0,IVS-Ⅱ-654C→Tand-28A→G)］intheChinesebyusingmultiplexallele-specificPCR(MASPCR)andassessthereliabilityofthisnewtechnique.MethodsAimingdirectlyatwildtypesandmutationtypesofβ----本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---globinalleles,MASPCRwasperformedinasingletubetomakeaprenataldetectionofthecommonfivekindsofpointmutationsofβ-thalassemia.ResultsSeventeencasesin24ofeightfamilieswereheterozygotedwithatleastonemutationallele.Amongthefetus,onewasdoubleheterozygotesofβ-thalassemiamutations,fivesingleheterozygotes,andtwonormal.Allwereconfirmedlaterbygeneanalysisafterdeliveryorabortion,whichcoincidedwiththeprenataldiagnosis.ConclusionThistestingmethodcanbeusedfordetectionofcharacterizedpointmutationsinβ-thalassemia,whichisconvenient,reliableandeconomicalforprenatalgenediagnosisofβ-thalassemiawithabroadprospectinaristogenesis.［KEYWORDS］Thalassemia;Prenataldiagnosis;Polymerasechainreactionβ-地中海贫血是一种遗传性血液病，其病因是由于β-珠蛋白基因不同类型的点突变引起β-珠蛋白链合成减少（β+）或缺失（β0），因而过剩的α链与红细胞膜结合最终引起溶血性贫血。该病在世界范围内均有报道，几乎见于所有人群和种族，在我国南方省份β-地中海贫血亦有较高的发病率［1］。β-地中海贫血的分子缺陷具有高度异质性，主要表现为个别碱基的缺失、插入或置换，迄今世界范围已发现180多种突变类型，国内也发现了20多种突变类型---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---［2,3］。由于该病的临床后果严重，因此对夫妇进行产前诊断以避免病儿出生以及对病儿进行早期诊断和治疗具有重要意义。本研究针对中国人中发病率较高的5种β-地中海贫血突变类型：CD71-72（+A）、CD41-42（-4bp）、CD17→0、IVS-Ⅱ-654C→T和-28A→G设计和合成5组扩增引物，应用单管多重等位基因特异性PCR(MASPCR)技术对24例β-地中海贫血病儿或携带者进行基因诊断。现将结果报告如下。1资料和方法1.1病例选择共检测了8个家庭24例受试者，在来自父母的样本中，夫妇年龄26～37岁，并且经血液学及血红蛋白检查双方至少有一人确诊为β-地中海贫血，全部受试者均来自青岛大学医学院附属医院,5例正常对照为门诊健康查体者，无β-地中海贫血病史。按照知情同意原则，8个家庭均自愿进行产前诊断。1.2方法1.2.1样本采集及DNA提取按文献［2］所述方法，采集羊水样本或外周静脉血，血液标本经ACD抗凝，-80℃保存。取10mL羊水或1mL血液样本，采用常规苯酚-氯仿-异戊醇法(25∶24∶1)抽提DNA，随后用乙醇进行沉淀，将所得DNA溶解于TE(1mmol/LEDTATris-HCl,pH8.0)，终浓度为200mg/L。1.2.2引物设计和合成应用DNAStar软件设计MASPCR引物，引物由上海生物技术公司进行引物合成，所有引物3′端针对正常与突变---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---◁文笔绘...