南华大学学报医学版JournalofNanhuaUniversity(MedicalEdition)遗传、高保真DNA聚合酶、基因检测阮长耿"(苏州人学血液病研究所，江苏苏州2150()0)关键词:遗传；高保真DNA聚合酶；基因检测；评述:Q311文献标识码：C:1000-2510(2003)02・0127・01第31卷第2期Vol,31No,2遗传与变异是牛物进化和牛命活动最基木和永恒的主题。其中，遗传物质在个体和物种中如何维持其稳定性，更是当代生物咲学研究中的热点o高保真DNA聚合酶通过其著名的校正或称之谓错配碱基修复机制，参与了遗传物质稳定性的维持2。高保真DNA聚合酶除含冇聚合酶活性外，该酶分子同时具有3’一5’外切酶活性，正是通过此外切功能对有待延伸的引物或DNA复制过程中新生DNA链三末端或近三末端不配对碱某的校正，使DNA介成终产物的保真度得到了维讣3JV°人类基因测序计划的完成，使人类步入了后基因组时代。在后基因组时代的医学研究与实践中，一个现实而又迫切的问题是如何冇效地利用人类基因组序列所提供的大量信息，以造福人类的医疗卫生和保健事业，如疾病遗传背景分析，已知遗传病的诊断等。人类基因测序计划所提供的数以百力计的单碱基多态性(SNP)位点是人类基因组中一个个可辨认的物理标志4厲，从这些SNP位点岀发，我们nJ以更有效地认识和利用人类基因组数据库。本刊发表分別以张佳、彭翠英、郭紫芬、陈琳玲为第一作者的有关高保真DNA聚合酶保真机制的新认识及利用高保真DNA聚合酶进行单碱基水平基因检测的•文章，希望起到抛砖引玉的作用。有别于其它SNP分析方法,高保真DNA聚合酶介导的SNP分析方法，对基因组中单个碱基的差别，具冇更高效和更准确的识别能力-9。尤为重要的是，这一新方法除适应高通量分析外，也能与凝胶电泳技术联合使用，对我国这样的发展中国家遗传病诊断耳预防的普及，具有十分现实的意义。在这里，我们再一次看到了理论对实践的指导意义。高保真DNA聚合酶所介导的聚合反应的非成熟性终止了〜9，突破了三|•多年来对冇关高保真酶通过错配校止机制以维持DNA保真性的单一认识,使我们可以在更新和更广阔的领域研究有关遗传与变界及疾病与健康等有关生命的永恒主题。而这一新的保真机制通过与耐核酸外切酶修饰的等位基因特异性引物相结合，则孕育了一种在满足可靠性与适应性的基础上能广泛应用于基础研究和临床基因诊断的SNP分析新方法。人类基因组学、单碱基多态性、高保真DNA聚合酶、和单碱基水平诊断遗传病，在后基因组时代不再是一些陌生的概念，已越来越广泛地应用于当代遗传学研究和保学实践之中。可以预期，高保宾DNA聚介酶在SNP检测中的应用，将在很大程度上加快牛物医学的发展，并対当代医学实践带來深远的影响。参考文献：1DrakeJW,AllenEF・AnlimuiagenicDNApol}meraseofbacteriophageTiJ・QuantBiol,1968,33:339・344.2DrakeJW,AllenEF,ForsbergSA,elal.Spontaneousmutation.CcneticcontrolofmutationratesinbacteriopIrage14J.Nature,1969,221:1128・1131.(下转第134页)*阮长耿教授系中国工程院院士.正时，则引发聚合反应非成熟性终止。另外，ltl于该SNP敏感的“开/关”系统対SNP的检测不依赖限制性内切酶的酶解消化，因而在单基因遗传病的诊断以及SNP的高通最分析方面，具有广阔的应用前景o根据上述理论，本实验对GB3基因中与耳聋相关的突变位点进行了准确的检测。使用止常人的染色体DNA样本,该方法仅能使野生型等位基因相关的引物得以延仲，而耳聋基因相关引物则不能被延伸，表明本方法在单碱基水平对单碱基突变的遗传病具有很髙的特异性。对DNA重组得到的杂合子也能准确检测，对该神经性耳聋相关个体的临床检测正在进行之中。11前，无论是单碱棊突变的单基因遗传病的诊断，还是SNP的实验或临床检测，通常需要釆用PCR反应对待测DNA样品进行放大，然后对预先放大的DNA特定片段进行分析。在分析单一DNA样品或待分析样品数量较少时，对待测样品的预先放大与否対检测效率并没有明显影响；然而,当需要对单一染色体DNA样品进行数百或数千单碱基位点的多态性分析时，这一•对待测样品的预先放人既不经济也儿乎不可能，同时，这一现况已成为严重制约后基因组时代生物医学适应高通量分析的技术...