一株野生侧耳属菌株的分离鉴定与生物学特性摘要：采用组织分离的方法从野生侧耳属菌株(Pleurotussp.)子实体上分离得到菌株XZG-ts,以其基因组为模板扩增获得该菌株的ITS序列，序列分析结果表明，菌株XZG-ts与GenBank中来自于澳大利亚、印度和中国云南的3个肺形侧耳菌株聚为一簇，组内核昔酸一致率为100%,而与侧耳属其他4个种的10个菌株核昔酸一致率为98.10%〜99.06%,依此结果将XZG-ts菌株鉴定为P.pulmonariuso进一步研究了不同碳源、氮源、碳氮组合、温度及pH值对菌株XZG-ts菌丝生长的影响，结果表明，最适碳源为果糖，氮源为酵母膏，最佳碳氮源组合为果糖1%＞麦芽糖1.0%、酵母膏0.2%、蛋白月东0.3%,最适生长温度为25°C,最适pH值为60关键词:侧耳属菌株;ITS序列分析;生物学特性；肺形侧耳中图分类号：S646.9文献标识号：A文章编号：1001-4942(2016)12-0091-04AbstractAfungistrain,XZG-ts,collectedfromtheMountainTai,wasisolatedbytissueisolationandtheinternaltranscribedspacers(ITS)wasamplifiedbyPCR.InthephylogenetictreeconstructedwithITS,XZG-tsformedabranchwith3isolatesbelongingtoPleurotuspulmonariusfromAustralian,IndiaandChinawiththeconsistentrateof100%inintra-groupnucleotide.Whileitwasonly98.10%〜99.06%withother10isolatesofPleurotus・ThereforeXZG-tswasidentifiedasP.pulmonarius・Theeffectsofcarbonsource,nitrogensource,carbon・nitrogencombinationandpHvalueonthegrowthofmyceliumwerefurtherstudied・Theresultsshowedtheoptimumcarbonsource,nitrogensource,temperatureandpHvaluewasfructose,yeastextract,25°Cand6,respective!y.Andtheoptimumcarbon・nitrogencombinationwas1%fructose,1.0%maltose,0.2%yeastextract,0.3%peptone・KeywordsPleurotussp.；ITSsequeneeanalysis；Biologicalcharacteristic；Pleurotuspulmonarius侧耳属［Pleurotus(Fr.)P.Kumm.］是与人类关系密切的重要经济真菌，世界广泛存在20种［1］,对木质纤维素的转化以及环境修复作用倍受关注［2］。近200年来，侧耳属描述的分类单元超过2000个⑶，主要原因是子实体形态受环境条件影响大，按照形态特征分类导致较多的同物异名或同名异物。我国侧耳属真菌野生资源丰富，分布范围也极其广泛。本研究从泰山分离获得一株野生侧耳属菌株，对其进行鉴定,并研究明确了该菌株菌丝体最适培养条件，为产业发展和教学科研提供了新的种质资源，同时为进一步开发利用奠定基础。1材料与方法1.1供试菌株将采自泰山的野生侧耳属菌株参照文献⑷进行组织分离、纯化，标为XZG-tSo1.2主要试剂真菌总DNA提取试剂盒(E.Z.N.A.FungalDNAKit),购自北京全式金公司；PCR所用试剂，均为大连宝生物公司产品；常规试剂，为进口分装或国产分析纯试剂。1.3菌株的分子鉴定1.3.1菌丝体制备及DNA提取将保存的母种切取5mm2小块,接种于PDA加富平板培养基中央,25°C黑暗培养5〜7d,待菌丝生长到接近平板边缘，刮取菌落边缘的新鲜菌丝，利用真菌总DNA提取试剂盒提取基因组总DNAo1.3.2ITS扩增参照文献⑸所报道的用于真菌ITS区域扩增的通用引物ITS1/ITS4进行PCR扩增。PCR反应体系和程序参照文献［4］。1.3.3序列分析PCR结束后，取PCR产物4PL进行琼脂糖凝胶电泳，检测扩增结果，将有目的条带的PCR产物送北京博尚生物公司测序；将所得DNA序列输入GenBank进行Blast检索，采用Clustalxl.81>DNASTAR、DNAMAN和MEGA5软件对所得核昔酸序列与GenBank中收录分离物的相应序列进行比较和分析，并构建系统进化树。1.4培养特性研究1.4.1碳源筛选试验供试碳源分别为葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、果糖，试验方法详见文献⑹。1.4.2氮源筛选试验供试氮源分别为蛋白腺、牛肉膏、酵母膏、硫酸鞍、硝酸鞍，试验方法详见文献1.4.3最佳碳氮源浓度组合选定适宜碳氮源后，釆用L9(34)正交表进行四因素三水平正交试验［7］,组合成供试培养基，接入菌龄一致的5mm2母种块,置于25°C恒温培养箱中培养，每处理重复5次。1.4.4温度试验于平板边缘取直径5mm的菌块接种于PDA培养基平板中央，分别置于15、20、25、30、35、40°C条件下倒置暗培养...