GBLP相互作用蛋白研究邱峰1)，毛小琴2)，陈世知3)，邱宗荫2)*(1)重庆医科大学附属第一医院，重庆400016；2)重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室，重庆400016；3)重庆医科大学附属第二医院，重庆400010）摘要为了进一步阐明GBLP在普萘洛尔（PRO）生物学效应发生机制中的作用，本文采用免疫共沉淀法结合HPLC-CHIP-IT-MS/MS系统筛选并鉴定了GBLP相互作用蛋白。结果表明，有7种蛋白与GBLP存在相互作用，分别为Casein-S1、Casein-S2、casein、桥粒芯蛋白1前体、烯醇化酶、果糖二磷酸醛缩酶C、硫氧还原蛋白过氧化物酶2。这些蛋白的生物信息学检索结果提示，GBLP可能参与了细胞的能量代谢调节和抗氧化机制，与PRO的生物学效应发生机制密切相关。关键词普萘洛尔；人脐静脉内皮细胞；GBLP；免疫共沉淀；液相色谱-芯片-离子阱串联质谱ScreeningandidentificationofGBLPinteractionalproteinsQIUFeng1),MAOXiao-Qin2),CHENShi-Zhi3),QIUZhong-Yin4)*,JIAXiong-Fei5)(1)theFirstAffiliatedHospital,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China;2)KeyLaboratoryofLaboratoryMedicalDiagnosticsofMinistryofEducation,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China;3)theSecondAffiliatedHospital,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400010,China)AbstractTofurtherelucidaterolesofGBLPinbiologicalcharacteristicsmechanismofpropranolol(PRO),Co-immunoprecipitationandHPLC-CHIP-IT-MS/MSwereusedtoscreenandidentityinteractionalproteinsofGBLP.Theresultsshowedthat7proteinsmightinteractwithGBLP,whicharecasein-S1,casein-S2,casein,desmoglein1precursor,enolase,fructose-bisphosphatealdolaseCandperoxiredoxin2.BioinformaticsoftheseproteinshintedthatGBLPmightparticipateenergymetabolismregulationandantioxidationincells,whichcloselycorrelatedtobiologicalcharacteristicsmechanismofPRO.Keywordspropranolol;humanumbilicalveinendothelialcell;GBLP;Co-immunoprecipitation;HPLC-CHIP-IT-MS/MS基金项目：重庆市自然科学基金项目（No.CSTC-2005BB5227）作者简介：邱峰，男，副主任药师*通讯作者：邱宗荫，男，教授，博士研究生导师TEL:023-68485727Email:zongyin@gmail.com所属专业：应用药理学在过去的工作中，我们采用比较蛋白质组学策略研究了普萘洛尔（PRO）对映异构体R(+)/S(-)-PRO诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）蛋白质表达谱差异，在所鉴定出的差异表达蛋白质中，发现G蛋白亚单位2样1蛋白（GBLP）在R(+)-PRO干预后的HUVEC中高表达[1]。GBLP是新近发现的RACK家族成员之一，又称为活化的蛋白激酶C受体1（RACK1），是细胞内多种信号分子的底物和相互作用蛋白[2-3]。已知GBLP可与蛋白激酶C（PKC）结合，作为细胞内受体使活化的PKC锚定于细胞骨架，参与细胞内多种信号通路级联反应。例如，GBLP可能在β2肾上腺素受体（β2-AR）介导的信号转导中起作用，它可使β受体发生非特异性脱敏（磷酸化），当沉默RACK1基因后，可显著减少β2-AR的磷酸化[3]；RACK1还可连结两个PKC亚型，从而调节PKC介导的心肌肥厚信号[4]。GBLP的这些作用可能与PRO保护心肌细胞、抗氧化、抑制血管平滑肌细胞增生等生物学效应和立体选择性的发生机制有重要关系，但目前尚无相关报道。本研究分别用PRO对映异体作用于HUVEC，采用蛋白质免疫印迹法（WB）、激光共聚焦扫描显微镜技术（LSCM）比较分析细胞内GBLP的表达情况和定位，再以免疫共沉淀法（Co-IP）和高效液相色谱-芯片-离子阱串联质谱系统（HPLC-CHIP-IT-MS/MS）筛选、鉴定HUVEC中的GBLP相互作用蛋白。希望通过本研究，进一步了解GBLP的功能，以及在PRO生物学效应及立体选择性机制中的作用。1材料与方法1.1HUVEC细胞株HUVEC细胞株由第三军医大学烧伤研究所馈赠。1.2试剂与仪器R(+)/S(-)-PRO、羊抗兔IgG-Cy3（Sigma公司），ReadyStripIPGStrip（pH3-10，17cm，linear）、Pharmalyte（pH3-10）、30%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺（29:1）、PVDF膜和化学发光试剂盒（Bio-Rad公司），羊抗兔IgG-HRP、蛋白A...
