斑贞1号联合TMP5FU对人胃癌细胞CDX2基因表达影响

斑贞1号联合TMP、5―FU对人胃癌细胞CDX2基因表达影响[摘要]目的探讨斑贞1号联合TMP、5-FU逆转人胃癌细胞系SGC-7901/ADR与CDX2相关性。方法从2015年6―12月在包头医学院第一附属医院中心实验室进行SGC7-901/ADR细胞培养,设①空白对照组、②5-FU组、③斑贞1号组、④5-FU+斑贞1号组、⑤5-FU+斑贞1号+TMP组观察细胞毒性,选取各个药物组作用浓度分别提取总mRNA,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)监测人胃癌细胞SGC-7901/ADR细胞在不同药物组的尾型同源基因2(caudal-relatedhome-odomaintranscriptionfactor2,CdX2)mRNA的表达情况。结果对照组CDX2mRNA表达量为(2.01±0.26),5-FU组CDX2mRNA表达量为(1.94±0.24),5-FU组与阴性对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),而5-FU联合斑贞1号及TMP处理组CDX2mRNA表达量为(0.44±0.07),与其他组明显降低比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论斑贞1号联合TMP及5-FU逆转人胃癌SGC-7901/ADR细胞耐药性可能与CDX2基因相关。[关键词]胃癌;斑贞1号;TMP;5-FU;多药耐药;CDX2基因[]R735.2[文献标识码]A[]1674-0742(2017)01(a)-0032-04在我国,胃癌的发生率和死亡率居恶性肿瘤前3[1],手术治疗一直是胃癌的首选治疗手段,但除日本外的大多数国家早期诊断率较低,因此根治手术率仍然较低,化疗在胃癌治疗中显得十分重要,但目前遇到最大问题是胃癌多药耐药性(MDR),近几年发现尾型同源基因2(caudal-relatedhome-odomaintranscriptionfactor2,CdX2)在胃癌细胞的多药耐药性调节中扮演重要的角色。侯培珍[2]研究结果示斑贞1号、5-FU和TMP联合对人胃癌SGC-7901/ADR细胞有明显的逆转作用。该实验从2015年6―12月在包头医学院第一附属医院中心实验室进行SGC7-901/ADR细胞培养,采用RT-PCR比较人胃癌细胞SGC-7901/ADR细胞在不同药物组CDX2mRNA的表达量,进一步探讨斑贞1号+5-FU+TMP对人胃癌SGC-7901/ADR细胞的作用机理,现报道如下。1资料与方法1.1一般资料细胞系胃癌SGC-7901/ADR细胞(人胃癌细胞)。1.2药物、试剂及主要仪器自拟“斑贞1号”每mL含露蜂房、山茱萸、斑蝥、女贞子各0.2g。5-FU(规格10mL:0.25g,国药准字H31020593)、TMP(规格40mg,国药准字H20031302)、RPMI1640培养基(RPMI是RoswellParkMemorialInstitute的缩写,1640是培养基代号)。其中含有10%胎牛血清,二甲基亚砜、胰蛋白酶,新生小牛血清两步法RT-PCR试剂盒,Trizol,引物,PCR扩增仪、电泳仪(DF-D)、紫外分光度计、紫外透视成像系统。1.3实验方法1.3.1细胞处理以5×104/mL接种于6孔板上,每孔2mL,培养24h后,实验孔依次加入等量的新的培养液;5-FU稀释液;斑贞1号稀释液;斑贞1号+5-FU稀释液;斑贞1号+5-FU+TMP稀释液(选取各自的IC50值)。培养48h后,PBS缓冲液冲洗,准备提取总mRNA。1.3.2RT-PCR检测以mRNA为模板经逆转录合成cDNA,每个反应体系25uL,目的基因引物各0.5uL,TakaraTaq1uL,10×PCRBuffer(Mg2+Plus)2.5uL,dNTPMixture---本文来源于网络,仅供参考,勿照抄,如有侵权请联系删除---2uL,ddH2O13.5uL;各?悠?cDNA5uL,β-action的正义列为5'-AGAGCGGCATGAAGAAGGAGTG-3',反义列为5?@-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3',CDX2基因序列的正义列引5-TCAGACCTACGCCGAATATGC-3’,反义列引物为5'-GAAATGGGAGAAGGTAGTGTCAAA-3',灭菌蒸馏水13.5uL。预变性→变性→退火→延伸条件分别是、98℃、2~4min→98℃、8s→55℃、12s→72℃、55s,共30个循环,最后延伸72℃10min。扩增结束,取样品10uL,经100V恒压,2%琼脂糖电泳60min,采集电泳图像,凝胶图象分析系统扫描得出各电泳带光密度值(即目的条带与内参条带光密度比值)。1.4统计方法应用SPSS17.0统计学软件对数据进行统计,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,并采用LSDt检验,P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1SGC7901/ADR细胞经不同药物处理后CDX2mRNA的表达5-FU组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。其他药物组与对照组及组间比较均差异有统计学意义。2.2CDX2和β-action的RT-PCR产物经琼脂糖分离的表达CDX2和β-action的RT-PCR产物经琼脂糖分...

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