高效大豆根瘤菌的筛选作者：张欣，李玉文转贴自：本站原创(1.东北林业大学林学院；2.黑龙江省科学院生物肥料研究中心，黑龙江哈尔滨1500X6)潼潼摘要：将选取的10株大豆根瘤菌菌株(HLJN1001,HLJN1002,HLJN1003,HLJN1004,HLJN1005,HLJN1006,HLJN1007,HLJNI008,HLJN1009,HLJN100I0)与在黑龙江省大面积栽培的5个大豆品种(垦农18号，垦鉴豆25号，合丰25号，据丰21-1381号，绥农4号)进行披佳共生匹配双瓶筛选试验，测定了大豆植株株高、叶片颜色、结瘤数、瘤干巫和植株地上部分干巫等生物学指标并进行统计分析，从中筛选出共生固氮结瘤能力強的优良菌株HLJN1001和HLJN1003。菖关键词：大豆根瘤菌；大豆品种；共生匹配；筛选滞中图分类号：S565」文献标识码：A文章编号：1007—6921(2011)10—0125—03潼根瘤M(Rhizobium)是一类广泛分布于土壤中的革兰氏阴性细菌，它可以侵染豆科植物根部，形成根瘤，固定空气中的分了态氮形成氨，为植物提供氮索营养。但根瘤菌与豆科植物独立存在时，不能利用大气中的N2,而当根瘤菌侵入豆科植物的根细胞并在其中迅速增殖后，可产生类菌体，并在根瘤内出现豆血红蛋白,同时具备类菌体和豆血红蛋H的根瘤便具有固氮能力。研究表明，不同的根瘤菌与人豆品种间的共生固氮能力存在着较大的差异［1,2］跡。因此，筛选与豆科作物品种匹配、固氮能力好、竞争结瘤能力强的优良菌株，是捉高根瘤菌应用效果的逼要途径［3］。现选取1()株大豆根瘤菌菌株，与5个在黑龙江省大面积栽培的大豆品种进行共生匹配性研究，从中筛选出优艮菌株，为大豆育种材料的选择和共生网氮作川的发挥捉供依据。滝1材料与方法潼1」试验材料潼1.1.1供试菌株蔦HUN1001,HLJN1002,HLJN1003,HLJN1004,HLJN1005,HLJN1006,HLJN1007,HLJN1008,HLJN1009,HLJN10010,共10株，由黑龙江省科学院生物肥料研究中心提供。潼1.1.2供试人豆品种篇垦农18号，垦鉴豆25号，合丰25号，疆丰21-1381号，绥农4号，共5个，为在黑龙江省广泛栽培的具有代表性的大豆品种。潼1.1.3培养基菖YMA：甘露醇lO.Og,K捋2HPO4坝0.25g,KH2PO40.25g,MgSO40.20g,NaCl0.lOg,CaCO33.00g,琼脂粉15g,蒸镭水1000ml,pH调至6.8〜7.0；Fahraeus无氮植物营养液(mg/1):Na2HPO4150,KH2PO将410(),MgSO4-7H2SO4120,CaCl210(),Fecitrate5,pH6.5；Gibson微量元素液(g/1):H府3BO将32.86,MnSO4H2O2.08,ZnSO4-7H2O0.22CuSO4-5H2O0.08,Na2MoO40.11,加无菌水至1000ml,使用时接1.0mg/l加入无氮培养基'I'ojfi1.2试验方法潼121大豆根瘤菌的培养胡将大豆根瘤菌HLJN1001,HLJN1002,HLJN1003,HLJN1004,HLJN1005,HLJN1006,HLJN1007,HLJN1008,HLJN1009,HLJN10010分别进行活化后，接种丁•大豆根瘤菌YMA液体培养基中，用摇瓶培养法在30°C培养条件下2()()ipn摇床中培养至发酵液菌体密度5()亿个/ml以上后，置于4°C的冰箱中低温保存备用。潼1.2.2有效活菌数测定方法菖血球板计数法结合平板稀释活菌计数法计算人豆根瘤菌数量；革兰氏染色、常规染色进行人豆根瘤菌生长状况检测及定性分析。潼1.2.3双瓶栽培法筛选人豆根瘤菌菌种謂此方法温室最佳共生匹配试验方案。潢1.231选取优良的大豆种子，放入无菌培养皿中，加入95%的乙醇，用枪头反复冲洗，以使种子表面被完全浸润。5min后吸掉乙醉，加入0.1%的升汞5ml,反复抽洗，消毒5min,然后用无菌生理盐水反复冲洗3次。1.2.3.2将表而消毒的种子置于垫有湿润滤纸的无菌培养皿中，于28°C温箱中培养2d〜3d,待主根长到2cm〜3cm时，进行栽培和接种。潼123.3采用双瓶法进行结瘤试验，每个大豆品种种植4瓶，每瓶中种植2株，共种植8株大豆植株。将萌发的无菌大豆种了种于无菌双层瓶中，上层的塑料瓶中装满灭过菌的蛭石，下层玻璃瓶中装有无氮营养液，用纱布经上层的塑料瓶底部的小孔引流到上层瓶中，以保持上层瓶中蛙石的湿润度，双层瓶及其中的培养基利营养液都经过121°C高温湿热灭菌lh后冷却至室温备用。潼123.4选取上述在YMA培养基中培养至对数期的大豆根瘤菌菌液，以5OOORPM离心5min收集菌体，用生理盐水巫悬菌液，调整其浓度为107个/ml〜108个/ml。每瓶栽培大豆中大豆根瘤菌的接种量为lml,以不接种的大豆为对照，每组处理设4瓶重复...