预防兽医学专业毕业论文[精品论文]减毒鸡伤寒沙门氏菌△asd缺失株的构建及其携带外源基因的表达关键词：沙门氏菌鸡伤寒基因表达沙门氏菌疫苗摘要：沙门氏菌是一种非常重要的人兽共患病病原菌，主要引起人和动物的发热、肠炎、败血症等多种疾病症状，呈全球性分布。沙门氏菌为胞内侵袭性细菌，能有效呈递抗原，激发抗沙门氏菌和诱导外源蛋白的特异性体液免疫与细胞免疫，并能同时诱导黏膜免疫与全身免疫。近几年，沙门氏菌常通过宿主载体平衡致死系统构建新型疫苗载体。减毒鸡伤寒沙门氏菌疫苗株97A是经转座突变及粗糙变异筛选所获得，本实验室已从安全性、免疫效力和病理组织学等各个方面对97A疫苗株作出评价，研究结果表明，该减毒株具有较好的安全性和免疫效力。本研究旨在研制更加安全的减毒鸡伤寒沙门氏菌97A疫苗株，并将其开发为新型活疫苗载体。以97A为亲本菌，缺失基因组中编码天冬氨酸-β-半乳糖脱氢酶的asd基因，构建asd宿主载体平衡致死系统，用于高效表达外源基因，初步应用该系统表达了红色荧光蛋白基因和新城疫F蛋白基因部分片段，为研制新型载体疫苗奠定了基础。1.减毒鸡伤寒沙门氏菌97A△asd缺失株的构建与鉴定为了研制更加安全的鸡伤寒沙门氏菌弱毒株，并使其开发为活疫苗载体，本研究构建了鸡伤寒沙门氏菌97A△asd缺失株，并以此建成宿主载体平衡致死系统。根据鸡伤寒沙门氏菌asd基因已发表的基因序列，设计并合成了2对引物，PCR方法扩增了asd上下游序列。通过氯霉素抗性基因替代asd基因中间片段，构建重组自杀性质粒，与鸡伤寒沙门氏菌野生菌接合转移，两步法筛选△asd缺失株。结果表明，△asd缺失株被成功构建，命名为97A△asd缺失株，其表型、生长特性及生化特征与野生菌保持一致。基因互补试验结果显示，该突变株能稳定表达红色荧光蛋白，即该宿主载体平衡致死系统能高效表达外源基因，为鸡伤寒沙门氏菌载体疫苗的进一步研究奠定了基础。2.新城疫病毒F基因部分片段在减毒鸡伤寒沙门氏菌97A△asd缺失株中的表达以重组质粒pVAXl-F为模板扩增594bp的NDV-F基因部分片段，亚克隆至原核表达质粒pYA3334中，获得X6212(pYA3334-F)。从大肠杆菌X6212提取重组质粒pYA3334-F，并将其电转化沙门氏菌中间宿主X3730进行甲基化处理，最后将甲基化的原核表达质粒pYA3334-F电转化X4550，SDS-PAGE电泳和免疫试验检测到F表达。将验证正确的重组质粒pYA3334-F电转化97A△asd缺失株，SDS-PAGE电泳检测F表达。携带F的重组菌97A(pYA3334-F)及对照菌97A(pYA3334)以1△109CFU/只肌注免疫雏鸡，结果表明该重组菌是安全的，免疫组产生了针对F蛋白的1gG抗体，二免二周平均抗体效价至1:200，三免二周平均抗体效价至1:400。上述结果为进一步研制新城疫新型疫苗奠定了基础。---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---正文内容沙门氏菌是一种非常重要的人兽共患病病原菌，主要引起人和动物的发热、肠炎、败血症等多种疾病症状，呈全球性分布。沙门氏菌为胞内侵袭性细菌，能有效呈递抗原，激发抗沙门氏菌和诱导外源蛋白的特异性体液免疫与细胞免疫，并能同时诱导黏膜免疫与全身免疫。近几年，沙门氏菌常通过宿主载体平衡致死系统构建新型疫苗载体。减毒鸡伤寒沙门氏菌疫苗株97A是经转座突变及粗糙变异筛选所获得，本实验室已从安全性、免疫效力和病理组织学等各个方面对97A疫苗株作出评价，研究结果表明，该减毒株具有较好的安全性和免疫效力。本研究旨在研制更加安全的减毒鸡伤寒沙门氏菌97A疫苗株，并将其开发为新型活疫苗载体。以97A为亲本菌，缺失基因组中编码天冬氨酸-β-半乳糖脱氢酶的asd基因，构建asd宿主载体平衡致死系统，用于高效表达外源基因，初步应用该系统表达了红色荧光蛋白基因和新城疫F蛋白基因部分片段，为研制新型载体疫苗奠定了基础。1.减毒鸡伤寒沙门氏菌97A△asd缺失株的构建与鉴定为了研制更加安全的鸡伤寒沙门氏菌弱毒株，并使其开发为活疫苗载体，本研究构建了鸡伤寒沙门氏菌97A△asd缺失株，并以此建成宿主载体平衡致死系统。根据鸡伤寒沙门氏菌asd基因已发表的基因序列，设计并合成了2对引物，PCR方法扩增了asd上下游序...