严重烧伤后肠黏膜肌球蛋白轻链磷酸化表达改变及其意义陈传莉1,刘依凌1,王裴1,孙玮2,王凤君1(第三军医大学:1西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,2基础医学部中心实验室,重庆400038)摘要:目的探讨肌球蛋白轻链(myosinlightchain,MLC)磷酸化在严重烧伤早期对肠黏膜屏障功能及细胞紧密连接相关蛋白变化的作用。方法健康成年SD大鼠48只,采用随机数字表法分为正常对照组及烧伤后1、2、6、12、24h组,用异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-Dextran)检测大鼠肠黏膜通透性,免疫荧光法检测肠黏膜细胞紧密连接相关蛋白ZO-1、F-肌动蛋白(F-actin)及磷酸化型MLC(phosphorylatedMLC,p-MLC)的变化。结果烧伤后大鼠肠黏膜通透性明显增加,伤后6h达高峰,为对照组的3倍(P<0.01);烧伤后肠上皮通透性的增加伴随有紧密连接相关蛋白ZO-1的明显重分布、细胞紧密连接损害以及肠上皮细胞p-MLC表达的增加。结论MLC磷酸化可能在严重烧伤后肠黏膜屏障功能紊乱及通透性增加的发生机制中起着重要的调控作用。关键词:烧伤;肠黏膜;通透性;肌球蛋白轻链磷酸化;ZO-1中图法分类号:R322.45;R329.25;R644.02文献标识码:ARoleofMLCphosphorylationinintestinalepithelialbarrierdysfunctioninducedbysevereburninjuryCHENChuan-li1,LIYi-ling1,WANGPei1,SUNWei2,WANGFeng-jun1(1StateKeyLaboratoryofTrauma,BurnsandCom-binedInjury,InstituteofBurns,SouthwestHospital,2CentralLaboratory,CollegeofMedicine,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China)Abstract:ObjectiveTodeterminetheroleofmyosinlightchain(MLC)phosphorylationinintestinalepithelialbarrierdysfunctioninducedbysevereburninjury.MethodsForty-eighthealthyadultSpragueDaw-leyratswererandomlydividedintocontrolgroup,1,2,6,12and24hpostburngroups.Theintestinalperme-abilityofallratswasmeasuredbyfluorescein-isothiocyanate-dextran(FITC-D).ThechangesoftightjunctionassociatedproteinZO-1,F-actinandphosphorylatedMLC(PMLC)inintestinalepitheliaoftheratswereana-lyzedbyimmunofluorescence.ResultsTheintestinalpermeabilityoftheratsincreasedsignificantlyafterburninjury,andpeakedat6h3higherthanthecontrolrats.Theincreasedintestinalpermeabilitywasaccom-paniedbythestrikingreorganizationofthetightjunctionassociatedproteinZO-1,thedamageofthetightjunc-tionandthesignificantincreaseofPMLCinratswith---本文于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---burnedintestinalepithelia.ConclusionMLCphospho-rylationmightplayaveryimportantroleintheregulationofintestinalepithelialbarrierdysfunctionaftersevereburninjury.Keywords:burn;intestinalmucosa;permeability;MLCphosphorylation;ZO-1严重烧伤后肠道组织明显受损,屏障功能紊乱,通透性增加,从而引发或加重一系列病理生理变化。黏膜通透性的改变与细胞骨架重组,紧密连接结构变化有着密切关系,但迄今为止,对烧伤后肠黏膜屏障功能紊乱及通透性增加的发生机制仍未完全明了。最近有重烧伤后肠上皮屏障功能紊乱机制方面的研究。研究表明[1-3],上皮细胞收缩性改变是不同原因引起其通透性增加的共同通路,主要受骨架蛋白中肌球蛋白和肌动蛋白的影响,并依赖于肌球蛋白轻链(myosinlightchain,MLC)的磷酸化。MLC磷酸化引起的细胞紧密连接相关蛋白ZO-1改变在炎症介质或内毒素所致的肠上皮屏障功能紊乱中起着重要作用。因此,我们推测烧伤后肠黏膜屏障功能紊乱可能也与肠上皮细胞MLC磷酸化有关。本课题旨在研究严重烧伤早期肠黏膜屏障功能及细胞紧密连接相关蛋白ZO-1的变化,并探讨MLC磷酸化在其中的作用,以进一步阐明烧伤后肠黏膜屏障功能紊乱的发生机制。1材料与方法1.1实验材料1.1.1动物健康成年SD大鼠48只,雌雄不拘,体质量(180±20)g,由本校大坪医院野战外科研究所实验动物中心提供。1.1.2主要试剂及仪器异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-Dextran,相对分子质量为4.4×103)及DAPI购自Sigma公司,兔抗ZO-1抗体为ZymedLab...