动物体外受精技术的研究进展熊廷蓉(重庆文理学院林学与生命科学学院，重庆永川402160)摘要：哺乳动物体外受精技术主要包括卵母细胞的采集和体外成熟、精了获能、体外受精及早期胚胎培养。本文阐述了动物体外受糟技术的研究进展，存在问题并对今后的研究方向和前景提岀了展與。关键词：体外受精；卵母细胞；体外成熟；精了获能；胚胎培养中图分类号：Q132.1ResearchProgressofAnimalInVitroFertilizationXiongTingrong(ChongqingUniversityofArtsandSciences>SchoolofForcstiyandLifeScience,Chongqing402160,China)Abstract:Mcanwhilc,thcresearchdircctionandprospectofthistechniquearcalsopresented・ThetechnologyoftheIVFonmammalsmainlycomprisedpickingupovumandmaturationcultureinvitro,spermcapacitation,invitrofertilizationandearlyembryonicdcvcIopmcnt.ThisarticlebrieflyreviewedthetechnologyoftheIVFandproposedthepresenceandprospectsofmammalsinvitrofertilizationtcchnology.Thcresearchdirectionandprospectofthistechniquearcalsopresented・Keywords:IVF;oocyte;invitromaturation;spermcapacitation;earlyembryonicdevelopmentCLC:Q132.1体外受精(InVitroFertilization,IVF)是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术⑴。1982年，美国学者Brackett等培养出世界第一胎体外受精牛，此后，多种动物的体外受精都在不断研究并相继取得一定的成果⑵。近年来，研究者在不断改良培养液、培养条件等，尽量模拟体内受精和发育环境，以提高胚胎体外生产效率。但到目前为止，体外受精技术还存在一定的局限性，在完全体外化的条件下生产胚胎还有很多问题尚待解决。体外受精技术的完善可以实现胚胎移植技术在生产上的广泛应用；加快良种进化；为胚胎工程技术提供研究材料和技术支持，具有广阔的发展和应用前景。1动物体外受精技术研究方法1.1卵母细胞的釆集和成熟培养1.1.1卵母细胞的采集方法不同季节母畜的卵巢机能活动不同。卵母细胞的采集应在母畜的繁殖季节，此时卵巢机能活动最活跃，卵泡生长发育较好，卵母细胞质量好，体外成活率高⑶。卵母细胞的釆集方法通常有三种。1.1.1.1从屠宰的母畜卵巢上采集卵母细胞该方法是从刚屠宰的母畜体内摘取卵巢，洗涤后经30・37°C保温快速运冋实验室，在无菌条件下用真空泵或注射器吸取卵巢表面一定直径卵泡中的卵母细胞，或卵巢切片收集卵母细胞⑷。此方法获得的卵母细胞多处于生发泡期，需经成熟培养后才能与精子受精。这种方法的优点是材料来源丰富，成本低廉，但确定母畜系谱困难，卵巢质量难以保证，且受季节影响较大。1.1.1.2从活体卵巢中采集母畜卵母细胞⑸该方法是借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。此方法在间隔一定时间后重复取卵，不影响母畜的繁殖性能，为充分利用良种母畜和珍惜动物提供了新途径。但是，活体采集的卵母细胞一般要经成熟培养后才能与精子受精。1.1.1.3进行超数排卵处理该方法用促卵泡素和促黄体素处理母畜后，从输卵管中冲取成熟卵子并可以与获能精子受精。该方法关键是要掌握卵子进入输卵管和卵子在输卵管维持受精能力的时间，在其具有旺盛受精能力前进行；优点是可以提高家畜的利用率，并可控制体外受精的卵子发育阶段，进而提高体外受精效率⑹。1.1.2卵母细胞质量评定⑺根据卵丘的完整程度及形态将卵子分为4种类型：A类：有致密卵丘细胞层完全包裹着的卵子；B类：卵丘细胞层不完全包裹的卵子；C类：完全裸露的卵子；D类：卵丘细胞层呈现蜘蛛网状地附着在卵子上的卵子。研究表明，A、B类卵子体外的成熟率明显高于C、D类卵子。1.1.3卵母细胞的体外成熟1.1.3.1培养基条件未成熟的卵母细胞需在体外进行成熟培养方可与精子受精。卵母细胞成熟培养液为基础成熟液+血清+激素。目前常用的培养液有TCM199、HanVsFlO,和HanfsF12,其中TCM199应用比较广泛。资料显示，用TCM199对牛、绵羊、山羊和猪的卵母细胞进行体外培养，成熟率达80%以上。有研究证明，培养条件与受精率和囊胚发生率有较强相关性，因此，家畜卵母细胞成熟培养液的研制是胚胎...