广西碑暴露人群血液生物标志物的初探黄小琪1陈晶1林洪升2黄盼柳3林英辉2通讯作者广西中医药大学第一附属医院1・分子生物实验室,2・检验科,3.广西医科大学微生物教研室广西南宁530023基金项目:广西科学研究与技术开发计划课题【摘要】目的探讨金属硫蛋白(Metallothionein,MT)>吟核昔磷酸化酶(PurineNucleosidePhosphorylase,PNP)、0—GlcAc糖基转移酶(0—lingedGlcActransferase,OGT)mRNA的表达水平作为职业性币申暴露人群早期牛物学指标的意义方法用原子荧光分光光度计检测尿碑含量^Real-timePCR方法检测血样中MT1a>MT2a、PNP和OGT的mRNA表达水平.结果病例组尿砕浓度高于对照组,MT1a>MT2a>PNP、和0GTmRNA表达水平高于对照组.结论MTla、MT2a、PNP、和OGT可作为广西职业性碑暴露人群早期检测的牛物学标志.【关键词】砕暴露;金属硫蛋白;瞟吟核昔磷酸化酶；O-GlcAc糖基转移酶;ThestudyofpopulationwitharsenicexposurebloodbiomarkerinGuangxiHUANGXiao—qi1,CHENJing1,LINHong—sheng2,LINYing—hui2A(1DepartmentofMolecularBiologyLaboratory,2DepartmentofLaboratory/TheFirstAffiliatedHospitalofGuangxiUniversityofChineseMedicine,NanGning530023,China??E—maiklinyinghui63@163??com)[Abstract]AIM:ToexploretheexpressionofMetallothionein(MT)xPurineNucleosidePhosphorylase(PNP)>0—lingedGIcActransferase(OGT)mRNAwhichsignificanceofearlybiologicalmarkersinarsenicexposurepopulation??Methods:TheuricarsenicwasdeterminedbyAtomicfluorescencespectrophotomeGter??ThemRNAexpressionofMT1a>MT2a、PNP>OGTwasevaIuatedbyquantitativereal——timePCR??Results:Theconcentrationofuricarsenicofcasegroupishigherthaneontrolgroup??ThemRNAexpressionofMT1a,MT2a,PNPandOGTarehigherwithcasegroup??CONCULUSION:MT1azMT2a,PNP,andOGT[cKoeuyldwobredesa]rlybiomarkersinpopulat:ionwhomoccupationalexposuretoarsenicinGuangxi??Arsenicexposure;Metallothionein;NucleosidePhosphorylase;O—lingedGIcActransferase;【中图分类号】R135.1【文献标识码】B【文章编号】1008—6315(2015)12-1247-011前言神(Arsenic)在1987年被世界卫生组织(WorldHealthOrganization,WHO)5ffi认为致癌物[1].神暴靂与健康效应之间存在剂量一反应关系[2].iAs及其化合物与人类的皮肤癌、肺癌、肾癌等许多癌症有密切相关[3].广西矿产资源丰富，冶金行业前景广阔，提示神及其化合物中毒的防治工作意义重大[4].截至目前,广西人群中是否存在灵敏度、特异性都令人满意的生物学标志仍鲜有报道•本研究以广西某冶炼厂员工作为神暴露研究人群，通过检测血液样品中神代谢相关酶金属硫蛋白(Metallothionein?MT)>吟核昔磷酸化酶(PurineNucleosidePhosphorylase,PNP)x0—GlcAc糖基转移酶(0—lingedGlcActransferase,OGT)mRNA的表达水平，探讨这五种基因在广西神暴露人群中作为早期标志物的意义.1??1材料和方法1??1??1研究对象和实验材料1??1??1??1研究对象选取典型抽样方法选取男性50名，入选标准为年龄35-60岁、无明显疾病，冶炼厂工作一年以上,再选取50名非冶炼厂工人(男性)为对照.1??1??1??2尿样采集用一次性聚乙烯管收集空腹晨尿,4°C下保存，一个月之内完成尿神检测.1??1??1??3血样采集用一次性乙二胺四乙酸抗凝管采集外周血，保存在4°C,24h内按照试剂盒完成RNA采集.1??2主要仪器和试剂Real—timePCR试剂盒(天根公司，中国)'引物合成(Invitrogen,美国)，荧光定量PCR仪(ABI公司，美国),RT—PCR仪(Eppendorf公司,德国)，双通道原子荧光光度计(北京吉天仪器有限公司，中国)・1??3实验方法1??3??1尿神含量测定尿样经处理后，用双通道原子荧光光度计测定.1??3??2总RNA提取和荧光定量PCR循环参数:预变性95°C10min,95°C变性15s,60°C退火/延伸6Os收集荧光，共40个循环•通过基于内部参照GAPDH的定量分析，目的基因mRNA表达量用2ZXCT计算转录水平的差异(引物序列见表1).1??4统计学分析应用SPSS13??0软件对所有数据进行统计学处理.RealtimePCR实验重复三次'实验数据以均数±标准差...