高效液相色谱一串联质谱法同时测定水产品硝基咲喃类代谢物残留摘要建立了一种同时测定水产品中硝基咲喃类代谢物残留的超高效液相色谱串联质谱方法•样品经乙酸乙酯提取，用正己烷脱脂，HLB固相萃取柱净化，采用LCMS/MS选择反应监测(SRM)正离子模式测定进行定性及定量分析.结果表明：硝基咲喃类代谢物检测结果的相对标准偏差为1.2%〜10.3%(n=6),加标回收率达到68.6%〜106.2%.该方法重现性好、灵敏度高、分析时间短、确证能力强，适用于水产品中硝基咲喃类代谢物残留的确证检测.关键词高效液相色谱串联质谱法；硝基咲喃类代谢物；水产品TS2547文献标识码A10002537(2013)05004506硝基咲喃类代谢物属于一种人工合成的广谱抗菌药物，它主要包括咲喃哇酮、咲喃西林、咲喃妥因和咲喃它酮等.硝基咲喃类由于具有杀菌性而被广泛应用于畜禽和水产等动物传染病预防与治疗[13].该类药物半衰期短，在动物体内代谢速度快，与蛋白结合的代谢物产生稳定的残留，形成的代谢产物3氨基2噁哩烷酮(A0Z)、3氨基5吗咻代甲基2噁哩烷酮(AMOZ)、氨基淼(SEM)、1氨基乙内酰腺(AHD)均可使动物发生癌变和基因突变，人类长期使用可对其健康产生危害[46].欧盟在1995年已全面禁止咲喃类抗菌药物作为生长剂和杀菌剂用在饲料中，我国也于2002年颁布了禁止使用硝基咲喃类药物的公告.由于硝基咲喃在动物体内代谢速度快，不容易在动物组织中被检测到，通过14C标记表明[7],硝基咲喃代谢物在动物体内以蛋白结合物的形式存在，在体内能残留数周，这些结合残留物可通过在适当的酸性条件下释放出来，以达到检测硝基咲喃残留的目的[8].由于液相色谱串联质谱方法灵敏度高，前处理方法简单快速，可同时用于产品的检测和确证，农业部颁布了相关的标准采用液质法应用于食品当中硝基咲喃类代谢物的残留检测[910].该方法操作简单，成本较低，回收率满足要求，但是由于水产品成分比较复杂，基质中含有大量的脂肪、蛋白质等杂质，前处理过程中没有采取进一步的净化，流动相溶解后会有乳化现象产生，容易产生基质效应，而且会对仪器造成污染影响结果的准确性，导致假阳性的情况出现.本文建立了水产品中硝基咲喃类代谢物的液相色谱串联质谱检测方法，通过在前处理过程中采取固相萃取柱进行净化，减少样品带来的基质效应，提髙了色谱分析的功效，简单快速，灵敏度高，而且节约成本，能够实现药物残留的快速检测，可以满足水产品质检以及相关基础研究的要求.1实验部分1.1仪器与试剂ThermoTSQQuantum液相色谱高分辨串联四级杆质谱联用仪（配用电喷雾离子ESI源）；旋转蒸发仪（瑞士布奇公司）；高速冷冻离心机（日本日立公司）；超声波清洗器（昆山超声波仪器厂）；精密电子天平（梅特勒一托利多称重设备系统有限公司）；微型漩涡混合仪（上海沪西分析仪器厂）.标准储备液的配置：分别称取硝基咲喃类标准品各10.0mg,用甲醇溶解后转移至100mL棕色容量瓶中，用甲醇定容配置成100mg/L的标准储备液，在-18£下避光保存•使用时将上述标准储备液混合，用甲醇稀释成0.5、1.0、5.0、10.0、25.0、50.0mg/L不同浓度的标准工作液.内标储备液及使用液的配置：分别称取10.0mg各内标标准品，用甲醇溶解并定容，配成100mg/L的标准储备液,在-18°C下避光保存•准确吸取各内标储备液，用甲醇逐级稀释配成0.01mg/L的混合内标使用液，在-18£下避光保存.1.2色谱质谱条件采用电喷雾离子源（ESI）；喷雾电压：41kV；离子传输毛细管温度：350°C；碰撞气氫气压力：0.1Pa；鞘气流量：40arb；辅助气流量：30arb；扫描模式：多反应监测（SRM）；硝基咲喃类代谢物的母离子、子离子和碰撞能量见表2.1・3样品前处理称取2g样品至于50mL离心管中(精确至0.01g),加入200UL0.01mg/L的混合内标溶液，再加入5mL0.2mol/L盐酸溶液和0.2mL0.5mol/L2硝基苯甲醛溶液，在漩涡混合仪上充分混合1min.置于恒温水浴振荡器中(37°C)避光振荡16h,取出离心管冷至室温，加入5mL1.0mol/L磷酸氢二钾溶液，调节pH至7.0-7.5,加入8mL正己烷漩涡混匀后放入离心机离心10min(6000r/min),分层后取下层水相待过柱，固相萃取柱(HLB,3mL,60mg)依次用3mL甲醇，6mL水活化，取备用液过柱，采用在大气压力下自然过...