DNA甲基化抑制物对雌激素受体B在乳腺癌细胞中表达的影响及意DNA甲基化抑制物对雌激素受体B在乳腺癌细胞中表达的影响及意义【摘要】冃的：研究甲基化抑制物作用于乳腺癌细胞后对其ER—B表达的影响及意义。方法：抽取细胞总RNA,采用半定量逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)检测MCF—7与MDA-MB-231中ER—0的表达状况。在两种细胞中按作用浓度加入甲基化抑制约物5—AZA-CdR,反应一定时间后用RT-PCR的方法测定药物处理后ER-B的表达情况，分析影响及意义。结果：MCF—7的ER-P平均表达水平(0.54±0・44),药物处理后平均表达水平(0・76±0・53),较未经药物处理的细胞明显升高(P<0.05):MDA-MB-231是雌激素受体阴性的细胞株，不表达ER—0,纱物处理后ER-3出现表达平均水平为(0.32土0.11),P<0.05o结论：DNA去甲基化可以诱导ER-B表达增强或再表达，对于提高乳腺癌的内分泌治疗疗效和指导新辅助化学治疗有重大意义。【关键词】乳腺癌细胞；ER—B；DNA甲基化抑制剂:1009-5519(2007)17-2532-03：R73文献标识码：AEffectandsignificanceofDNAmethylationinhibitorontheexpressionofestrogenreceptor—BinbreastcarcinomacellsCHENDu,QIANLi-yuan,HUOZhi-jun(DepartmentofGeneralSurgeryII,ThirdXiangyaHospitalofCentralSouthUnivercity,Changsha410013,China)[Abstract]Objective：ToinvestigatetheexpressionofER-PinbreastcarcinomacellsbeforeandafterexposuretotheDNAmethylationinhibitor.Methods：MDA—MB—231andMCF—7cellsweretreatedwith5—AZA—CdR・TotalRNAwasextractedfromthetreatedanduntreatedcellsandRT-PCRwasusedtodeterminetheeffectofthetreatmentontheexpressionofER-B.Results：TheexpressionofER-BintreatedMCF—7cellswas0.76±0.63anditwashigherthantheuntreatedMCF—7cells0.54+0.44(P<0.05).TheER(-)MDA—MB—231cellswereactivatedby5—AZA—CdR,TheexpressionofER-BintreatedMDA—MB—231was0.32±0.11(P<0.05).Conclusion：TheDNAmethylationinhibitormayactivatetheexpressionofER-0inbreastcarcinomacells,itprovidesarationalefortheuseofinhibitorofDNAmethylationforthechemotherapyofbreastcancerandsupportstheEndocrinetherapyofbreastcancer・［Keywords］Breastcarcinomacell；Estrogenreceptor—3(ER—B)；DNAmethylationinhibitor雌激素受体(ER)是一类由配体激活的转录因子，是该受体的超家族成员［1］。雌激素通过ER介导的信号传导在乳腺癌的发生发展中起重要作用，雌激素的生理作用由雌激素受体a(ER-a)和B(ER—B)两种亚型介导，由两个独立的基因编码［2］。在正常的乳腺组织中两种亚型均有表达，ER-3占优势，表达位点以乳腺导管上皮细胞为主，在基质细胞也有表达。DNA甲基化是哺乳动物基因组的显著特征，正常DNA甲基化模式如果被破坏就会导致细胞癌变，已发现多种肿瘤细胞中肿瘤抑制基因的失活与该基因启动子区域CpG岛的过度甲基化有直接关系［3］。ER的出现是对乳腺癌患者进行抗内分泌治疗的依据，大约2/3患者其乳腺癌组织ER表达水平比正常人高，这些肿瘤细胞…般分化较好，生长转移缓慢，对抗内分泌治疗敏感,疾病缓解期长。但约1/4患者的乳腺癌组织无ER表达，这些肿瘤常分化差，生长分数高，临床预后不良,对抗内分泌治疗亦不敏感［4］。有研究表明ER基因甲基化与ER基因失活有关，如果ER基因CpG岛甲基化是ER表达丢失的机制之一，那么去甲基化必然引起ER基因再表达。本研究即针对甲基化抑制物5-Aza~2,-deoxycytidine(5-AZA-CdR)对乳腺癌细胞中ER—B的表达的影响，探讨去甲基化对乳腺癌治疗方面的意义。1资料和方法1.1一般资料：人类乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF—7购于湘雅细胞中心。DMEM和1640细胞培养液购自美国Hyclone公司，新生牛血清购自杭州四季青生物公司。5—AZA—CdR购于徳国Merck公司oTrizol购于Invitrogen公司,逆转录试剂盒为Fermentas(EU)产品。MDA-MB-231是ER(―)的高侵袭性人乳腺癌细胞株，用含15%新生牛血清的RPMI-1640培养基培养；MCF-7是ER(+)的低侵袭性人乳腺癌细胞株，用含15%新生牛血清的高糖DMEM培养基培养，置于37°C二氧化碳恒...