侯波，男，汉族，1969年生，山东省胶州市人1992年潍坊医学院毕业，副主任医师。:R394.2文献标识码:B:2095-4344(2016)41-06190-07稿件接受：2016-09-07心脏干细胞分离培养及其增殖与迁移的机制侯波1，朱先云2，王学坤3(青岛市胶州中心医院，1心内科，2内分泌科，山东省青岛市266300；3青岛市中心医院心内科，山东省青岛市266042)引用本文：侯波，朱先云，王学坤.心脏干细胞分离培养及其增殖与迁移的机制[J].中国组织工程研究，2016，20(41):6190-6196.DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.41.017ORCID:0000-0002-7743-0450(侯波)文章快速阅读：心脏干细胞的分离培养及检测大鼠心脏干细胞分离、培养免疫荧光检测相关分子标志物苏木精-伊红染色、Masson染色、免疫荧光染色文题释义：干细胞niche：在心脏干细胞的自我更新、生长增殖、多向分化和持续存活等方面需要依赖特定的微环境，即干细胞niche。干细胞niche对干细胞的作用是通过多种因素起作用的，例如干细胞间的相互作用、干细胞与邻近分化细胞的相互作用、干细胞与细胞因子、生长因子及黏附因子的相互作用等，干细胞niche调控干细胞自我更新、多向分化是一个复杂的网络。心肌重构：是由一系列复杂的分子和细胞机制导致心肌结构、功能和表型的变化，这些变化包括心肌细胞肥大、细胞凋亡、胚胎基因和蛋白质的再表达、心肌细胞外基质量和组成的变化。摘要背景：体外环境下进行心脏干细胞培养的过程中，生长微环境可能会对细胞的的增殖等产生一定的影响。目的：在体外环境下培养大鼠心脏干细胞，探讨心脏干细胞增殖、迁移的可能机制。方法：纳入SD大鼠10只，获得心肌组织块进行原代和传代培养。收集第3代心脏干细胞进行免疫荧光染色，进行干细胞鉴定，检测干细胞生长因子受体(c-kit)和CD45、CD90的表达。收集培养后的组织块，随机分为2份，一份用多聚甲醛进行固定，常规石蜡包埋后切片，进行苏木精-伊红染色、Masson染色以及细胞凋亡检测；另一份在培养基中添加EdU标记增殖细胞，采用免疫荧光染色检测c-kit阳性细胞以及基质金属蛋白酶2，9及转化生长因子β1等表达。结果与结论：①细胞鉴定结果：心肌组织培养7-10d后有明亮的圆形细胞长出，细胞贴壁后呈梭状，生长、增殖能力旺盛。免疫荧光染色可观察到大量细胞呈c-kit、CD45阳性表达，CD90阴性表达；②细胞凋亡情况：培养的组织块切片后染色见大量新生细胞生长的同时伴随心肌细胞的凋亡；③免疫荧光染色结果：经EdU标记后阳性细胞分布于心肌间隙，基质金属蛋白酶2，9及转化生长因子β1少量表达，但周围心肌组织上述3因子表达明显增多。④结果表明，心肌组织体外培养可获取心脏干细胞，伴随细胞增殖和迁移，其机制与基质金属蛋白酶2，9及转化生长因子β1的表达有关。关键词：干细胞；培养；心脏干细胞；心脏；细胞稳态；微环境；作用机制主题词：组织工程；干细胞；细胞增殖HouBo,Associatechiefphysician,DepartmentofCardiology,激aozhouCentralHospitalofQingdao,Qingdao266300,ShandongProvince,ChinaCardiacstemcells:isolation,culture,proliferationandmigrationHouBo1,ZhuXian-yun2,WangXue-kun3(1DepartmentofCardiology,2DepartmentofEndocrinology,激aozhouCentralHospitalofQingdao,Qingdao266300,ShandongProvince,China;3DepartmentofCardiology,QingdaoCentralHospital,Qingdao266042,ShandongProvince,China)AbstractBACKGROUND:Intheprocessofcardiacstemcellcultureinvitro,thegrowthmicroenvironmentmayhavesomeeffectsonthecellproliferation.OBJECTIVE:Toinvestigatethepossiblemechanismofproliferationandmigrationofratcardiacstemcellsculturedinvitro.METHODS:Cardiactissuesfrom10Sprague-Dawleyratswereobtainedforprimarycultureandsubculture.Passage3cellswerecollectedforimmunofluorescencestaining,andstemcellgrowthfactorreceptor(c-kit)andCD45,CD90weredetected.Culturedtissueswerecollectedandrandomlydividedintotwogroups:ingroup1,paraformaldehydefixation,paraffinembedding,hematoxylin-eosinstaining,Massonstaining,anddetectingapop...