蒙古黄罠内生真菌的分子鉴定马伟，龚贺，刘秀波，张艳贺，孔祥军(黑龙江中医药大学药学院，哈尔滨150040)摘要：目的：从中药植物黄罠根中分离鉴定黄罠内生真菌。方法：通过内生真菌DNA的提取测序，并于相应真菌形态鉴定相对照，确定内牛真菌种类。结果：在分离得到的28株黄罠内生真菌中，镰孑包菌属19株，生赤壳属3株，裸胞壳属2株，枝穂霉属、枝顶砲属、W-霉属及曲霉属各1株。关键词：中药；黄罠；内生真菌；分离；分子鉴定；中图分类号：R931.71TheStudiesonMolecularIdentificationofEndophyticFungifromtheAstragalusmongolicusMAWei,GONGHe,LIUXiubo,ZHAHNGYanhe,KONGXiangjun(PharmaceuticalSchool,HeilongjiangChineseMedicineUniverstiy,Harbin150040)Abstract:InthispapermainobjectisisolatedtheEndophyticFungifromtherootofAstragalusmongolicusandMolecularIdentification.Method:ThroughtheextractionoftheendophyticfungiDNAandsequencing,combineMorphologicalsureendophyticfungitype.Result:Intthe28strainsendophyticfungiseparatedformastragalus・fusariumis19strains.Bionectriais3strains.Emericellanidulansis2strains.Clonostachys,Acremonium,PenicilliumandAspergillusiseach1strain.Keywords:ChineseMedicine;Astragalusmongholicus;EndophyticFungi;MolecularIdentification0引言黄罠是一种传统中药，首载于我国占代第一部本草著作《神农本草经》，为豆科多年生草本植物蒙古黄罠(Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicusHsiaoBgc.)、膜荚黄罠(Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.)K干燥根。黄罠味甘，性微温,具有补气升阳,益卫固表、托疮牛肌、保护肝脏等功效。用于气虚乏力，食少便瀟，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，痈疽难溃，久溃不敛，血虚痿黄，内热消渴；慢性肾炎蛋白尿，糖尿病等，是临床和保健的常用中药。黄罠的化学成分主要为多种黄酮类和三菇皂营类化合物。三菇皂营是由三祜皂莉元和糖经糖廿键连接而成的配糖体，它广泛存在于自然界，尤以双子叶植物中分布最多。在植物中，皂昔的主要功能是防御病原体和害虫。然而，最引人注目的是它们具有抗肿瘤、抗病毒、降低胆•固醇等多种生物活性，有着相当可观的药用商业价值山3］。在自然界中，很多具有重要价值的三祜皂昔往往产量很低。内牛菌长期牛活在植物组织内部，与寄主协同进化，在演化过程中二者形成了互惠共牛的关系，二者的相互作用会产生一些不寻常的和有价值的化合物|4-6］雷公藤TripterygiumwilfordiiHook.f.中内卞真菌串珠镰抱胶抱变种Fusariummoniliformevar.subglutinaris代谢物中存在两种二祜类化合物subglutinolA和subglutinolBf7io杨靖等⑻发现内生真菌能促进血龙树中血褐的形成。干剑文等［9］人发现黄花篙内生炭疽菌(Colletot「iehumsp.B501)细胞壁寡聚基金项目：2009年度“博士点基金”新教师类课题(20092327120007)；2009年教育部科学技术研究重点项H(209042)作者简介：马伟(1969-),女，研究员，主要研究方向：药用植物生物11©.E-mail:maboshi99@yahoo.com.cn糖提取物可以诱导黄花篙发根细胞中Ca2+的增加，从而促进发根青篙素的合成。在金钗石斛离体培养条件下，内生真菌与金钗石斛共培养能提高金钗石斛的生物碱和多糖含量[⑼。本实验选用不同的微生物培养基，以蒙古黄罠根块为材料，提取分离内生真菌，对得到的内生真菌进行分子生物学鉴定。1材料与方法1.1仪器及试药试验仪器：BECKMANCOULTERAllegra64RCentrifuge台式高速低温离心机（上海K迅实业有限公司设备厂）；Nikon—80i显微镜（JAPAN）；DYY11B型三恒电泳仪、DYCP—31A型电泳槽（北京市六一仪器厂）；ThermalCyclerPCR扩增仪（德国eppendorf公司）；WFH-201BT型可见反射透射仪（上海精科实业有限公司）。试验试药：牛肉膏、酵母提取物、胰化蛋白陈、蛋白陈、可溶性淀粉（北京奥醇星生物技术有限责任公司）:EDTA、SDS；ITS1F：CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA,ITS4A：CGCCGTTACTGGGGCAATCCCTG,6xDNAloadingbuffer、Marker>Taq酶、dNTP、10xBuffer>MgC12（±海生工生物工程技术服务有限公...