氯化较甘草合剂微生物限度检查方法的验证氯化鞍甘草合剂微生物限度检查方法的验证【摘要】目的:建立氯化鞍甘草合剂微生物限度检查的方法。方法:细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查均采用常规法进行验证［1］o结果:用常规法检查细菌、霉菌、酵母菌，菌落回收率均高于70%,用常规法检查控制菌，试验组检出，阴性对照组未检出。结论:氯化鞍甘草合剂无抑菌作用，可用常规法进行微生物限度检查。【关键词】氯化銭由草合剂;微生物限度检查;验证【屮图分类号】R927・2【文献标识码】B【文章编号】1006-1959(2009)10-0264-02系统的方法学验证可以避免因为选择方法不合理而造成漏检、误判，以保证结果的科学可靠［2,3］。1材料1.1主耍仪器、药品:仪器:医用净化工作台YJ-875(苏州净化设备厂),电热恒温培养箱HH-B11•500(上海市跃进医疗器械一厂),霉菌培养箱XL-3(上海虹浦仪器厂)等。药品：氯化鞍甘草合剂(批号:080108,180ml/瓶,苏州市中医医院)。1.2培养基及稀释剂:营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤、改良马丁培养基、改良马丁琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、MUG培养基、pH7.0氯化钠蛋白月东缓冲液均由北京三药科技开发公司提供。1.3验证试验用菌种:大肠埃希菌［CMCC(B)44102］、金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］、枯草芽胞杆菌［CMCC(B)63501］、白色念珠菌［CMCC(B)98001］、黑曲霉［CMCC(B)98003］,均由江苏省药品检验所提供，以上菌种所用菌株均未超过5代。2方法与结果2.1细菌、酵母菌及霉菌计数方法的验证2.1.1供试液的制备:取供试品10ml,加pH7.0无菌氯化钠蛋白月东缓冲液至100ml,混匀，制成1:10的供试液。2.1.2菌液的制备：①大肠埃希菌；金黄色葡萄球菌；枯草芽胞杆菌一新鲜培养物接种至营养肉汤培养基,30°C~35°C培养18〜24h,取ImL营养肉汤培养物至9mL0.9%无菌氯化钠中［1］,10倍稀释至10-5-10-7之间。②白色念珠菌:新鲜培养物接种至改良马丁培养基,23°C~28°C培养24〜48h,取ImL营养肉汤培养物至9mL0・9%无菌氯化钠中［1］,10倍稀释至10-6o③黑曲霉:新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基23°C〜28°C培养5〜7d,用5mL0.9%无菌氯化钠将抱子洗脱，无菌纱布过滤抱子悬液，取ImL抱子悬液至9mL0.9%无菌氯化钠屮［1］,10倍稀释至10-5o2.1.3菌落计数方法的验证:常规法:①试验组:取1：10供试液ImL,分别加入10个平皿中，再依次加入以上5种菌的菌悬液ImL（含50〜lOOcfu）,每株菌平行制备2个平皿，立刻倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，分别置30°C~35°C培养48h和23°C~28°C培养72h计数。②菌液组:分别取上述稀释的菌悬液ImL注入平皿内，每株菌平行制备2个平皿，立刻倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基,分别置30°C~35°C培养48h和23°C~28°C培养72h计数。③供试品对照组:取1:10供试液ImL分别注入4个平皿中，立刻倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，每种培养基制备2个平皿，分别置30°C〜35°C培养48h和23°C〜28°C培养72h计数［1］。2.1.4实验结果见表lo由表1可见木品用平皿菌落计数法，说明该法可以用于氯化钱甘草合剂细菌、酵母菌及霉菌的检查。2.2控制菌检查方法的验证:大肠埃希菌检查方法的验证:①试验组:取1：10的供试液10mL,接种至lOOmL胆盐乳糖增菌培养基内,加入大肠埃希菌75cfu,35°C〜37°C培养18~24h,可见培养基浑浊,有气体产生。分别取上述培养液0.2mL接种至5mLMUG培养基的试管内,培养5h、24h,在366nm紫外灯下观察，均可见荧光反应,滴加靛基质,液面均呈玫瑰红色，为阳性反应［1］。②阴性对照组:取1：10的供试液10mL,接种至lOOmL胆盐乳糖增菌培养基内，加入金黄色葡萄球菌93cfu,35°C〜37°C培养18-24h,培养基均无浑浊及气体产生。分别取上述培养液0.2mL接种至5mLMUG培养基的试管内，培养5h、24h,在366nni紫外灯下观察，均无荧光反应，滴加靛基质，液面均呈试剂本色,为阴性反应［1］。用lOOmL胆盐乳糖增菌培养基可以用于氯化钱甘草合剂大肠埃希菌的检查。3结论本实验结果可得知氯化钱甘草合剂无抑菌作用，其微生物限度检查可采用常规法进行:取本品IOhiL,加pII7.0无菌氯化钠蛋白月东缓冲液至lOOmL混匀，作1：10供试液。参考文献［1］药典...