食品(微生物学检验沙门氏菌)的检验

中华人民共和国国家标准GB4789.4—2010食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验NationalfoodsafetystandardFoodmicrobiologicalexamination:Salmonella2010-03-26发布2010-06-01实施中华人民共和国卫生部发布GB4789.4—2010前言本标准代替GB/T4789.4-2008《食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验》。本标准与GB/T4789.4-2008相比,主要变化如下:——修改了标准的中英文名称;——修改了标准的范围;——修改了培养基和试剂;——修改了设备和材料;——修改了附录A。本标准的附录A、附录B为规范性附录。本标准所代替的历次版本发布情况为:——GB4789.4-84、GB4789.4-1994、GB/T4789.4-2003、GB/T4789.4-2008。IGB4789.4—20101食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验1范围本标准规定了食品中沙门氏菌(Salmonella)的检验方法。本标准适用于食品中沙门氏菌的检验。2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:2.1冰箱:2℃~5℃。2.2恒温培养箱:36℃±1℃,42℃±1℃。2.3均质器。2.4振荡器。2.5电子天平:感量0.1g。2.6无菌锥形瓶:容量500mL,250mL。2.7无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。2.8无菌培养皿:直径90mm。2.9无菌试管:3mm×50mm、10mm×75mm。2.10无菌毛细管。2.11pH计或pH比色管或精密pH试纸。2.12全自动微生物生化鉴定系统。3培养基和试剂3.1缓冲蛋白胨水(BPW):见附录A中A.1。3.2四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液:见附录A中A.2。3.3亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液:见附录A中A.3。3.4亚硫酸铋(BS)琼脂:见附录A中A.4。3.5HE琼脂:见附录A中A.5。3.6木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂:见附录A中A.6。2GB4789.4—20103.7沙门氏菌属显色培养基。3.8三糖铁(TSI)琼脂:见附录A中A.7。3.9蛋白胨水、靛基质试剂:见附录A中A.8。3.10尿素琼脂(pH7.2):见附录A中A.9。3.11氰化钾(KCN)培养基:见附录A中A.10。3.12赖氨酸脱羧酶试验培养基:见附录A中A.11。3.13糖发酵管:见附录A中A.12。3.14邻硝基酚β-D半乳糖苷(ONPG)培养基:见附录A中A.13。3.15半固体琼脂:见附录A中A.14。3.16丙二酸钠培养基:见附录A中A.15。3.17沙门氏菌O和H诊断血清。3.18生化鉴定试剂盒。BSXLD(或HE、显色培养基)3GB4789.4—20104检验程序沙门氏菌检验程序见图1。检样25g(mL)样品+225mLBPW36℃±1℃,8h~18h1mL+TTB10mL1mL+SC10mL42℃±1℃,18h~24h36℃±1℃,18h~24h36℃±1℃,40h~48h36℃±1℃,18h~24h挑取可疑菌落TSI,赖氨酸,NA,靛基质,尿素(pH7.2),KCN生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统+H2S+靛基质-尿素-KCN-赖氨酸+H2S+靛基质+尿素-KCN-赖氨酸+H2S-靛基质-尿素-KCN-赖氨酸+/-反应结果与左侧描述不符甘露醇+、山梨醇+ONPG-沙门氏菌,血清学试验非沙门氏菌报告图1沙门氏菌检验程序5操作步骤5.1前增菌称取25g(mL)样品放入盛有225mLBPW的无菌均质杯中,以8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或置于盛有225mLBPW的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min。若样品为液态,不需要均质,振荡混匀。如需测定pH值,用1mol/mL无菌NaOH或HCl调pH至6.8±0.2。无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中,如使用均质袋,可直接进行培养,于36℃±1℃培养8h~18h。如为冷冻产品,应在45℃以下不超过15min,或2℃~5℃不超过18h解冻。5.2增菌轻轻摇动培养过的样品混合物,移取1mL,转种于10mLTTB内,于42℃±1℃培养18h~24h。同时,另取1mL,转种于10mLSC内,于36℃±1℃培养18h~24h。5.3分离分别用接种环取增菌液1环,划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板(或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板)。于36℃±1℃分别培养18h~24h(XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板)或40h~48h(BS琼脂平板),观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表1。表1沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板沙门氏菌BS琼脂菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色,菌落周围培养基可呈黑色或棕色;有些菌株形成灰绿色的菌落,周围培养基不变。HE琼脂蓝绿色或蓝色,多...

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