原因不明的视神经炎线粒体DNA突变检测

原因不明的视神经炎线粒体DNA突变检测【摘要】目的了解原因不明的视神经炎(opticneuritisofunknownreason,ONUR)患者线粒体DNA(mt-DNA)突变情况,探讨mt-DNA突变检测在ONUR诊断和鉴别诊断中的应用价值。方法运用单链构像多态分析、突变特异性引物多聚酶链反应以及序列分析法等检测30例ONUR患者mt-DNA突变情况。结果30例患者中mt-DNA11778突变者12例,占40%。mt-DNA3460和15257在所有受试者中均为阴性。结论相当一部分ONUR是mt-DNA突变所致;mt-DNA突变检测对ONUR的诊断和鉴别诊断有重要意义。【关键词】视神经炎;DNA,线粒体;DNA,突变分析中分类号:R774.61R446文献标识码:A文章编号:1005-1015(2000)02-0078-02Screeningformt-DNAmutationsinopticneuritisofunknownreasonGUOLi,JIAXiaoyun,XIAOXueshan,etal.(ZhongshanOphthalmicCenter,SunYat-senUniversityofMedicalSciences,Guangzhou510060,China)【Abstract】PurposeToinvestigatemitochondrialDNA(mt-DNA)mutationsinopticneuritisofunknowreason(ONUR)andtoassessthepathogenicanddifferentialdiagnosticvaluesofscreeningformt-DNAmutationsinONUR.MethodThirtypatientswithONURwerescreenedformt-DNAmutationsbyusingSSCP,mutation-specificprimerPCRandsequencing.Resultsmt-DNAmutationswerefoundin12outofthethirtypatients.Allofthemutationswereat11778position,butnooneat3460and15257.ConclusionsQuiteanumberofpatients(12/30,40%)withONURwerecausedactuallybymt-DNAmutation.Screeningformt-DNAmutationinthesepatientshasapathogenicanddifferentialdiagnosticsignificance.【Keywords】Opticneuritis;DNA,mitochondrial;DNA,mutationalanalysis原因不明的视神经炎(ONUR)在临床上并不少见,许多患者治疗效果也不理想。有研究显示约20%ONUR由Leber遗传性视神经病变(Leber′shereditaryopticneuropathy,LHON)引起,此外至少20%ONUR日后可发展成多发性硬化(multiplesclerosis,MS)[1]。不同原因所致的视神经炎,其治疗和预后各不相同。基因诊断可确诊LHON,因而对ONUR病因分析、诊断与鉴别诊断也有重要意义。1资料和方法1.1资料无视神经炎家族史、原因不明、经临床检查后初步诊断为视神经炎的患者30例,男18例,女12例,起病年龄8~44岁,单眼患病5例,双眼患病25例。1.2方法抽取外周静脉血,抽提白细胞基因组DNA(含mt-DNA)。每种mt-DNA突变检测除采用单链构像多态分析(single-strandconformationalpolymorphism,SSCP)外,11778尚采用突变特异性引物多聚酶链反应法(mutation-specificprimerpolymerasechainreaction,MSP-PCR),3460和15257还采用序列分析法。检测各突变所用的PCR引物及PCR产物长度见表1。表1mt-DNA突变检测所用引物序列及PCR产物长度Tab.1Primersequencinginscreeingformt-DNAmutationsandlengthofPCRproductsPointofmutationPrimersequencingLongthofproduct(bp)117785′-AGCCCTCGTAGTAACAGCCA-3′(11641-11660)3405′-GGAGTATAGGGCTGTGACTA-3′(11980-11961)34605′-GGCATTCCTAATGCTTACCGA-3′(3357-3377)3065′-TGATCAGAGGATTGAAAC-3′(3363-3643)152575′-CCTGAAACATCGGCATTATCC-3′(15081-15101)2295′-AATGAAGGGCAAGATGAAGTG-3′(15310-15290)PCR循环条件:总体积50μ1,首次变性94℃5min,然后变性94℃45s,退火55℃1min,延伸72℃1.5min,30次循环。末次延伸72℃5min。SSCP:PCR产物稀释3倍,与等体积加样缓冲液(97%甲酰胺,20mmol/L乙二胺四乙酸,0.05%溴酚蓝和二甲苯氰)混合,96℃变性5min,-20℃骤冷,8%聚丙烯酰胺凝胶,15℃,30W电泳8~10h,银染后观察结果。MSP-PCR:所用引物和方法同文献[2]。序列分析:PCR产物纯化后,直接测序(ABI310,PE)。2结果30例ONUR患者均未检测到3460和15257突变,但其中12例存在11778突变。结合临床表现,这12例的诊断修正为LHON,其中男性11例,女性1例,年龄10~32岁,平均19.33岁。3种mt-DNA突变均阴性的18例患者,经CT或MRI检查及内科会诊后2例确诊为MS,年龄分别为18岁和19岁;1例确诊为左桥脑小脑神经鞘瘤,25岁。确诊后3例患者...

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