与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的抗凝血因子、粘附分子【摘要】目的探讨平滑肌细胞对内皮细胞功能的影响，为内皮细胞种植的组织工程学提供理论基础。方法模拟血管壁的内层结构及内皮细胞与平滑肌细胞间的相互影响途径，建立内皮细胞与平滑肌细胞接触生长的联合培养模型，用免疫细胞化学、放射免疫学技术和像分析等方法研究内皮细胞vWF、PGI2、CD29的合成、分泌及表达。结果联合培养的内皮细胞的Ⅷ因子相关抗原(vWF)的合成减弱，前列腺环素的分泌增加，整合素β1亚族的表达增强。结论联合培养内皮细胞的细胞因子的合成、分泌和表达的变化更有利于其抗凝血及抗应力功能的调节。【关键词】血管；内皮细胞；平滑肌细胞；联合培养；前列腺环素；Ⅷ因子相关抗原；粘附分子β1亚族【中分类号】R318.01；R318.11【文献标识码】A【文章编号】0529-1356(2000)04-347ANTICOAGULANTFACTORSANDADEHISIONFACTORSOFECsCO-CULTUREDWITHSMCsCHENShuang-hongJIANGZong-laiZHANGYanZHANGChuan-senLIYu-quanCONGXing-zhong（DepartmentofAnatomy,InstituteofBiomedicalEngineering,theSecondMillitaryMedicalUniversity,Shanghai200433,China）【Abstract】ObjectiveEffectsofsmoothmusclecells(SMCs)onfunctionofendothelialcells(ECs)hasbeenstudiedinordertosupportthebasictheoryfortissueengineeringtoECsseeding.MethodsAnewco-culturemodelofECs-SMCswhichmimickedtheinteriorarchitectureofvesselandalsoimitatedtheinteractionpatternsbetweenECsandSMCswasestablished.Immuno-cytochemistry,radio-immunityandimageanalysiswereappliedintheresearchofsynthesis,secretionandexpressionofvonwillebrandfactor(vWF),prostacycline(PGI2)andintegrinsβ1(CD29)oftheECs.ResultsTheproductionofvWFreduced,andthereleasingofPGI2andexpressionofCD29increased.ConclusionThechangeofthesynthesis,releasingandexpressionofsomefactorsoftheECsisbeneficialtoregulatingthefunctionsofanticoagulatntandstress-resistanceoftheECsinco-culturemodel.【Keywords】Vessel;Endothelialcells;Smoothmusclecells;Co-culture;Prostacyclin;VonWillebrandfactor;Integrinsβ1随着生物医学技术的发展，人工生物替代材料在心血管系统疾病治疗中的应用越来越多，改善生物材料与血液的相容性以减少生物材料诱发血栓和钙化形成已成为研究热点。内皮细胞是天然的保护层，种植于人工材料表面的内皮单层可以产生类似的在体效果。然而，内皮细胞种植技术一直存在未解决的问题，即细胞的抗凝血功能明显不足、抗应力能力弱，导致内皮细胞种植的成功率不高。进一步完善人工血管内皮细胞种植技术，是当前组织工程学所面临的一个重要课题。研究表明［1］，完整的内皮细胞单层是防止血栓和钙化的前提，内皮细胞合成分泌许多因子，参与凝血和粘附过程。PGI2是至今所知最强的血小板聚集和释放的抑制因子，vWF是血小板粘附于内皮下层所必不可少的因素，β1粘附分子亚族是细胞与基质粘附的主要介导分子。因此，对内皮细胞中vWF、PGI2、β1粘附分子亚族的表达和活性的调节，将直接影响种植内皮细胞局部血栓形成和内皮细胞的粘附能力。国内外已有的研究中，对联合培养条件下，平滑肌细胞如何调节和影响内皮细胞的凝血因子和粘附分子的合成、分泌和表达，尚未见报道。本研究在建立内皮细胞与平滑肌细胞联合培养模型的基础上，对其中内皮细胞的凝血因子和粘附分子作了进一步研究，以探讨平滑肌细胞对内皮细胞功能的影响，为完善人工皮内细胞种植的组织工程学技术提供理论依据。材料和方法1.内皮细胞和平滑肌细胞的联合培养新生牛胸主动脉5～10cm，胶原酶(Sigma公司)和胰酶(Sigma公司)混合消化，获取内膜的内皮细胞；胰蛋白酶消化，获取中膜的平滑肌细胞。原代培养，传代至2～10代的平滑肌细胞经胰酶消化，调整细胞浓度到5×104个/ml，种植于PET膜(美国Falcon公司)的外面；在膜的内面以同样的浓度种值2～10代的内皮细胞，然后将PET膜插入配套的6孔培养板(美国Falcon公司)中，进行联合培养［2］。同时以单独培养的内皮细胞和在平...