国标-》用高效液相色谱法制备箭叶淫羊藿中五种黄酮类化合物

LC一025用高效液相色谱法制备箭叶淫羊藿中五种黄酮类化合物王超展耿信笃木(西北大学现代分离科学研究所现代分离科学陕西省重点实验室西安710069)淫羊藿,又名仙灵脾,其有效成分为8位具有异戊烯基(及其衍生基团)的黄酮醇或甙类化舍物,即淫羊藿甙类。淫羊藿为传统补肾牡阳中药,又能强筋骨,祛风湿。《中国药典》1995年版收载了该属淫羊藿、箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿和朝鲜淫羊藿五种植物的地上部分。目前,淫羊藿的有效成分多采用多步液一液萃取或液一液萃取和经典柱色谱相结合的方法进行分离制备”‘51,这种方法必须经过多步操作,多以手工操作为主,而且分辨率较低,不能将结构非常相似的几种化合物分开。高效液相色谱(HPLC)具有分离效率高,分离快速及自动化程度高等特点,所以一直被认为是一种理想的,很有发展前景的分离纯化手段。目前,采用有机溶剂一水溶剂为流动相的,以梯度洗脱方法的反相高效液相色谱(RP—HPLC)已广泛用于黄酮类化合物的研究,但其主要应用在定量分析中“。”,利用它来分离制备黄酮类化合物尚不多见。本文采用反相高效液相色谱法对箭叶淫羊藿中的主要黄酮类化合物进行了分离制备。采用半制备反相色谱柱,分别以甲醇和乙腈水溶液为流动相,比较其对箭叶淫羊藿提取液的分离情况,结果表明乙精水溶液对箭叶淫羊藿提取液的分离效果要远远优于甲醇水溶液,其分离结果如图l所示。因此实验中采用乙腈水溶液作为流动相分离制备箭叶淫羊藿中的主要黄酮类化合物。图l27%乙腈水溶液为流动相分离箭叶淫羊着提取液的半制各反相色谱圈色谱条件:Shim—packPREPCs(250X20raml.D.,15“m,100A)流速5.0mLlmin,进样量lmL,270nm紫外检测,室温从图1看出,27%乙腈水溶液能使箭叶淫羊藿提取液得到较好的分离,但峰3和峰4之间还没有达到基线分离。为了增大各物质之问的分离度,实验中采用25%7-,腈水溶液作为流动相对箭叶淫羊藿提取液进行了分离,峰3和峰4之间便可达到基线分离。当上样量达到7mL箭叶淫羊藿提取液时,用半制备色谱在25%7,腈水溶液为流动相分离时,分离效果会变差,但保留时间会缩短。虽然用23%7,腈水溶液在进lmL箭叶淫羊藿提取141液时在100分钟内未出峰,但在此条件下进30mL箭叶淫羊藿提取液时在150分钟内5种主要黄酮类化合物全部被洗脱出来,实验中分别考察了用泵进30mL、35mL和40mL箭叶淫羊藿提取液的色谱分离情况,结果表明当上样量达到40mL时峰3和峰4已基本上完全重叠,上样量30mL和35ⅢL时的分离情况相差不大,因此确定进样量为35mL,其色谱分离图如图2所示。图2上样量为35mL时箭叶淫羊藿提取液的半制备色谱圈色谱条件:流动相为23%乙腈.流速5.0mL/min,270nm紫外检测,室温在制备色谱中,进样是一项很重要的操作。实验中还对大体积低浓度上样和小体积高浓度上样两种不同的上样方式(两种进样方式中溶质的绝对量相等)作了比较,结果表明两种上样方式的色谱图基本相同。因此实验中用泵进大体积未浓缩的提取液,使得分离和富集一步完成,简化了操作步骤,提高了工作效率。在上述所确定的制备条件下,对箭叶淫羊藿提取液中的主要黄酮类化合物进行制各,采用峰中心切割收集峰1、峰2、峰3、峰4和峰5,连续多次制备,合并相同的色谱馏分,分别记为化合物I、II、Ⅲ、Ⅳ和V。采用分析型反相高效液相色谱对所得到的各化合物进行分析,结果表明化合物I、II、Ⅲ和V的纯度均大于95%,而化合物Ⅳ的纯度较低。因此将化合物Ⅳ再用半制备型高效液相色谱对其进行二次纯化,收集目标物的色谱馏分,反相色谱分析结果表明经二次纯化后的化合物Ⅳ纯度大于95%。对分得的5种化合物分别进行波谱分析,将得到的结果和文献所报道的已知化合物的波谱数据进行对照,确定了其结构,化合物I、II、III、Ⅳ和V分别为hexandrasideF、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及淫羊藿甙,其中hexandrasideF是首次从淫羊藿属植物中分离得到的。参考文献[1]凌一揆主编.中药学。上海:上海科学技术出版社出版,1991,221[23孙朋悦,徐颖,文晔等.中国药物化学杂志,1998,6(4),281[3]李文魁,肖培根,潘景岐等.中国药学杂志,1996,31(6):,332[4]贾宪生,吴家其.中国中药...

1、当您付费下载文档后,您只拥有了使用权限,并不意味着购买了版权,文档只能用于自身使用,不得用于其他商业用途(如 [转卖]进行直接盈利或[编辑后售卖]进行间接盈利)。
2、本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供参考,付费前请自行鉴别。
3、如文档内容存在侵犯商业秘密、侵犯著作权等,请点击“举报”。

常见问题具体如下:

1、问:已经付过费的文档可以多次下载吗?

      答:可以。登陆您已经付过费的账号,付过费的文档可以免费进行多次下载。

2、问:已经付过费的文档不知下载到什么地方去了?

     答:电脑端-浏览器下载列表里可以找到;手机端-文件管理或下载里可以找到。

            如以上两种方式都没有找到,请提供您的交易单号或截图及接收文档的邮箱等有效信息,发送到客服邮箱,客服经核实后,会将您已经付过费的文档即时发到您邮箱。

注:微信交易号是以“420000”开头的28位数字;

       支付宝交易号是以“2024XXXX”交易日期开头的28位数字。

客服邮箱:

biganzikefu@outlook.com

所有的文档都被视为“模板”,用于写作参考,下载前须认真查看,确认无误后再购买;

文档大部份都是可以预览的,笔杆子文库无法对文档的真实性、完整性、准确性以及专业性等问题提供审核和保证,请慎重购买;

文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为依据;

如果您还有什么不清楚的或需要我们协助,可以联系客服邮箱:

biganzikefu@outlook.com

常见问题具体如下:

1、问:已经付过费的文档可以多次下载吗?

      答:可以。登陆您已经付过费的账号,付过费的文档可以免费进行多次下载。

2、问:已经付过费的文档不知下载到什么地方去了?

     答:电脑端-浏览器下载列表里可以找到;手机端-文件管理或下载里可以找到。

            如以上两种方式都没有找到,请提供您的交易单号或截图及接收文档的邮箱等有效信息,发送到客服邮箱,客服经核实后,会将您已经付过费的文档即时发到您邮箱。

注:微信交易号是以“420000”开头的28位数字;

       支付宝交易号是以“2024XXXX”交易日期开头的28位数字。

文秘专家
机构认证
内容提供者

1

确认删除?