以CpG为佐剂人IL-24多克隆抗体制备

以CpG为佐剂人IL-24多克隆抗体制备【摘要】目的:采用在原核表达系统表达的人IL-24蛋白及人IL-24真核重组质粒免疫新西兰兔,制备兔抗人IL-24多克隆抗体。方法:利用IPTG诱导hIL-24在大肠杆菌中表达,纯化hIL-24重组蛋白,纯化后的蛋白经SDS-PAGE分析,同时提取hIL-24真核重组质粒,用以免疫新西兰兔,并以CpG为佐剂制备多克隆抗体。Western-blot鉴定抗体的特异性,ELISA法测定抗体效价。结果:人IL-24经IPTG诱导后可在大肠杆菌中大量表达,表达量占细菌总蛋白的30%,纯化后的蛋白纯度高;原核表达的重组蛋白和真核重组质粒免疫新西兰兔,通过抗体效价测定,获得了抗血清效价达1:640的多克隆抗体。结论:原核表达的hIL-24蛋白和hIL-24真核重组质粒均能刺激家兔产生抗体,其多克隆抗体的效价较高。【关键词】人IL-24;原核表达;真核重组质粒;多克隆抗体;CpG文章编号:1009-5519(2007)11-1583-03中图分类号:R33文献标识码:ACpG-ODNisanadjuvantforpreparationofthehIL-24polyclonalantibodyHUANGJun-qiong,SHENGWei-hua,XIEYu-feng,etal.(DepartmentofCellandMolecularBiology,MedicalSchool,SuzhouUniversity,Suzhou215123,China)[Abstract】Objective:ToimmunizerabbitswithhIL-24proteinexpressedinE.coliandeukaryoticrecombinantplasmidtopreparehIL-24polyclonalantibodies・Methods:TherecombinantproteinwasachievedinE.colithroughIPTGinduetionandwaspurified.TheproteinwasanalyzedbySDS-PAGE・RabbitswereimmunizedwithhIL-24proteinandeukaryoticrecombinantplasmidtopreparehIL~24polyclonalantibodies・CpG-ODNwasusedasanadjuvantforpreparationofthehIL~24antibody.Theantibodiesweredetectedbywestern-blotandELISA・Results:HumanIL-24couldbeexpressedinE.coliafterIPTGinduction.Therecombinantproteinwasabout30%oftotaiexpressedproductsinE.coli.Purifiedproteinwasachieved・Thepolyclonalantibodiesweresuccessfullypreparedandhadhighertitter(1:640).Conclusion:HIL-24recombinantproteinexpressedinE.coliandeukaryoticrecombinantplasmidcanstimulateantibodyinrabbits.【Keywords]HumanIL-24;Prokaryoticexpression;Eukaryoticrecombinantplasmid;Polyclonalantibody;CpG白细胞介素~24(Interleukin-24,IL-24)是Jiang等于1995年利用减数杂交技术从B-干扰素(IFN-B)和蛋白激酶激活剂MEZ诱导分化的人恶性黑色素瘤细胞H0-1中克隆的新基因[1]。人IL-24具有广谱的抗肿瘤活性,通过诱导肿瘤细胞凋亡、抑制血管生成、促进细胞因子分泌而增强抗肿瘤免疫应答等多种机制抑制多种组织来源的肿瘤细胞生长[2~4]。本室构建了高效原核表达载体pET-21a(+)-hIL-24。本实验利用IPTG诱导人IL-24在大肠杆菌中高效表达,纯化复性人IL-24蛋白,同时提取真核重组质粒pcDNA3-hIL-24,免疫新西兰兔,制备抗人IL-24多克隆抗体,为人IL-24的阻断实验及作用机制研究奠定了基础。1材料和方法1.1菌种、动物及主要试剂:工程菌株pET21a(+)-hIL-24及pcDNA3-hIL-24为本室保存,体重2.5kg左右的新西兰兔购自苏州大学实验动物中心;IPTG、DNA分子量标准、蛋白分子量标准购自TaKaRa公司,TaqDNA聚合酶购自上海申能博彩生物技术有限公司,DNA抽提试剂盒购自V-gene公司,辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG购自晶美公司,SuperECL超敏发光液购自普利来公司,CpG寡核昔酸由上海生物工程有限公司合成,序列为5'-TCCATGACGTTCCTGACGTT-3'。1.2rhIL-24在大肠杆菌中的表达及纯化:挑取单菌落于5mlLB培养基(100ug/ml氨节青霉素)中,37。(2振荡培养过夜,然后以1:50稀释,继续培养至0D600~0.6,加入IPTG至终浓度1mmol/L,37°C150r/min诱导5小时。收集菌液,离心取菌体,超声破碎,按本室常规进行洗涤、熔包、复性后透析,获得纯化rhIL-24蛋白,4°C保存备用。取样进行SDS-PAGE分析。1.3真核重组质粒的制备:挑取单菌落于5mlLB培养基(100ug/ml氨节青...

1、当您付费下载文档后,您只拥有了使用权限,并不意味着购买了版权,文档只能用于自身使用,不得用于其他商业用途(如 [转卖]进行直接盈利或[编辑后售卖]进行间接盈利)。
2、本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供参考,付费前请自行鉴别。
3、如文档内容存在侵犯商业秘密、侵犯著作权等,请点击“举报”。

常见问题具体如下:

1、问:已经付过费的文档可以多次下载吗?

      答:可以。登陆您已经付过费的账号,付过费的文档可以免费进行多次下载。

2、问:已经付过费的文档不知下载到什么地方去了?

     答:电脑端-浏览器下载列表里可以找到;手机端-文件管理或下载里可以找到。

            如以上两种方式都没有找到,请提供您的交易单号或截图及接收文档的邮箱等有效信息,发送到客服邮箱,客服经核实后,会将您已经付过费的文档即时发到您邮箱。

注:微信交易号是以“420000”开头的28位数字;

       支付宝交易号是以“2024XXXX”交易日期开头的28位数字。

客服邮箱:

biganzikefu@outlook.com

所有的文档都被视为“模板”,用于写作参考,下载前须认真查看,确认无误后再购买;

文档大部份都是可以预览的,笔杆子文库无法对文档的真实性、完整性、准确性以及专业性等问题提供审核和保证,请慎重购买;

文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为依据;

如果您还有什么不清楚的或需要我们协助,可以联系客服邮箱:

biganzikefu@outlook.com

常见问题具体如下:

1、问:已经付过费的文档可以多次下载吗?

      答:可以。登陆您已经付过费的账号,付过费的文档可以免费进行多次下载。

2、问:已经付过费的文档不知下载到什么地方去了?

     答:电脑端-浏览器下载列表里可以找到;手机端-文件管理或下载里可以找到。

            如以上两种方式都没有找到,请提供您的交易单号或截图及接收文档的邮箱等有效信息,发送到客服邮箱,客服经核实后,会将您已经付过费的文档即时发到您邮箱。

注:微信交易号是以“420000”开头的28位数字;

       支付宝交易号是以“2024XXXX”交易日期开头的28位数字。

文秘专家
机构认证
内容提供者

1

确认删除?