中药制剂发酵前后成分的变化及对肉鸡部分免疫指标和生长的影响摘要:采用HPLC法检测中药制剂发酵前后成分的变化,通过饲喂肉鸡试验对发酵前后制剂的应用效果进行比较。通过检测分析,中药中的一些成分经过发酵后含量增加1~4倍。并且产生了某些新的特征吸收峰,同时发酵前的几个特征吸收峰消失。肉鸡饲喂试验结果显示,中药发酵制剂组抗新城疫病毒的抗体效价、免疫器官指数、血细胞中RBC数量均高于未发酵制剂组,差异显著(P<0.05),且饲料利用率比未发酵制剂组明显提高。表明中药制剂经过发酵后成分发生了变化,增加了某些新的药物成分,应用效果优于未发酵的制剂。关键词:中草药发酵制剂;成分变化;肉鸡;生产性能中图分类号:S853.73文献标识码:A文章编号:0366-6964(2005)11-1223-05收稿日期:2004-11-04基金项目:国家/十五0科技攻关项目(2002BA514A-2-1-3)作者简介:韩春杨(1972-),男,河北人,硕士生,主要从事兽医微生物与免疫学研究。E-mail:luckyhcy@163.com*通讯作者:牛钟相,E-mail:zxniu@sdau.edu.cn近年来,中药在动物疾病防治中的应用十分广泛,发挥了巨大作用。随着中药制剂研究的深入发展,国内开展了通过微生物发酵手段以改革传统中药炮制方法的研究,并取得了一定进展[1~3]。通过微生物的降解作用,使药物的有效成分、活性物质能最大限度地提取出来,从而得以增强药效、减少用量、降低原料药的成本。本试验采用具有免疫增强作用的一组中药方剂,对其进行发酵,制成中药发酵制剂。利用HPLC法对发酵前后成分的变化进行了比较,并通过肉鸡饲喂试验对中药制剂发酵前后的免疫增强效果等进行了对比,取得了满意的结果。1材料与方法1.1材料1.1.1药物与试剂中药制剂:由黄芪、党参、茯苓、山楂、麦芽和白术组成;中药发酵制剂系将上述中药制剂进行发酵制成。乙腈(色谱纯);重蒸水;磷酸盐缓冲液(pH3.25);新城疫Ⅳ系疫苗(齐鲁动物保健品有限公司生产)。1.1.2试验动物1日龄艾维茵肉用雏鸡150只,泰安市种鸡厂提供。1.1.3主要仪器Waters515高效液相色谱仪,色谱数据处理:N-2000双通道色谱工作站;血液细胞自动分析仪F-820:日本希森美康株式会社生产;PHS-2C型酸度计;高速离心机等。---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---1.2方法1.2.1发酵前后成分的检测1.2.1.1发酵制剂的制备:取粉碎的中药制剂100g,加入200mL水,置于500mL三角瓶中,121e,15min高压灭菌。按照2%的接种量接入制备好的菌液,37e培养48h,备用。1.2.1.2待检样品的预处理:将发酵前后的液体样品分别以8000r/min离心5min,取上清液用0.45Lm的微孔滤膜过滤,备用。1.2.1.3液相色谱条件:色谱柱:钻石C18(250mm@4.6mm,5Lm);检测器:Waters2487紫外双波长检测器;流动相:A(pH3.25的磷酸溶液),B(乙腈),二元梯度洗脱,梯度洗脱条件为:0~5min,A(%)10~10,B(%)90~90;5~25min,A(%)10~20,B(%)90~80;25~27min,A(%)20~30,B(%)80~70;27~38min,A(%)30~35,B(%)70~65;38~40min,A(%)35~40,B(%)65~60;40~50min,A(%)40~40,B(%)60~60,见表1;检测波长:280nm;检测柱温:25e;灵敏度:0.8AUFS;流速:1mL/min;样品进样量:5LL。1.2.2动物试验将150只1日龄艾维茵肉鸡随机分为5组,每组30只。在2~6日龄和25~30日龄时分别投药两次,A组按饲料量1%的用量添加中药制剂,B、C、D组分别按1%、0.5%和0.25%的用量添加中药发酵制剂,E组为不添加任何药物的空白对照组,按常规方法饲养。畜牧兽医学报36卷表1梯度洗脱的条件Table1Conditionsofgradiontelution时间Time/min磷酸溶液/%(pH3.25)Phosphatesolution乙腈%Acetonitrile01090510902520802730703835654040605040601.2.3饲喂效果检测指标1.2.3.1新城疫抗体水平检测:于7、21日龄用新城疫Ⅳ系疫苗进行常规免疫,分别在19和35日龄时检测抗新城疫疫苗抗体水平。测定方法采用B-微---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---量法所测定的NDV的血凝抑制(HI)抗体,结果以log2表示[4]。1.2.3.2免疫器官指数测定:饲养至45日龄时扑杀所有鸡只,采集脾脏、法氏囊,用滤纸吸取表面的水分后,用精密天平称重,根据与体质量之比计算脾脏、法氏囊的器官指数。1.2.3.3血细胞测定:45日龄时翅静脉采血,每只...