HPLC法测定辣椒油中苏丹红染料的测量不确定度评定刘翠平Ξ,周永芳,夏碧琪(温州出入境检验检疫局,温州325027)摘要:建立了HPLC法分析辣椒油中苏丹红染料的不确定度模型,分析了方法中的不确定度分量及其来源,计算了各不确定度分量和合成标准不确定度。关键词:HPLC;苏丹红;不确定度;辣椒油文章编号:100020720(2008)012096204中图分类号:O657.7文献标识码:A4.6mmi.d.)。流速1mLΠmin。柱温为室温。进样量10μL。流动相:溶剂A为V(0.1%甲酸的水溶液)∶V(乙腈)=85∶15;溶剂B为V(0.1%甲酸的乙腈溶液)∶V(丙酮)=80∶20。溶剂梯度:0min,溶剂A为15%,溶剂B为85%;20min,溶剂A为0%,溶剂B为100%;25min,溶剂A为0%,溶剂B为100%;25.1min,溶剂A为15%,溶剂B为85%;30min,溶剂A为15%,溶剂B为85%。检测波长:对位红,苏丹红Ⅰ478nm;苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ520nm。2结果与讨论2.1不确定度模型的建立样品经过前处理后待测。配制一系列浓度的标准溶液,绘制标准曲线。根据标准曲线测定样品溶液的浓度。考虑标准曲线的制作与其拟合程度,定容体积和称样量,其不确定度模型测量不确定度对于测量结果之间的比较、数据解释、检测程序中需要注意的因素、方法的确认等具有十分重要意义。根据ISOΠIEC170251的要求,检测实验室应该具有并且应用评价测量不确定度的程序。苏丹红(sudan)为亲脂性偶氮化合物,主要包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ4种类型,是人工合成的工业染料。1995年欧盟等国家已禁止在食品中添加,对此我国也明文禁止。国家质检总局和国家标准委于2005年3月批准发布《食品中苏丹红染料的检测方法2高效液相色谱法》2国家标准。本文采用该标准方法测定了辣椒油样品中苏丹红染料,并依据国家技术监督局发布的《测量不确定度评定和表示》3,建立了该方法的测量不确定度模型,评定了该方法的测量不确定度,为正确评价和使用检测数据提供了依据。1实验部分1.1仪器与试剂美国Agilent公司HP1100型高效液相色谱仪,紫外可见检测器。SudanⅠ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ标准品(德国Dr.Ehren2storfer公司)。1.2样品前处理方法依据GBΠT1968122005,称取1g左右样品,用5mL正己烷溶解后,加入到氧化铝层析柱萃取净化,收集洗脱液,经浓缩后,用丙酮转移并定容至w=ρ(A)×V(1)m式中:w-样品中苏丹红质量分数,mgΠkg;ρ(A)-由标准曲线得出的样液中苏丹红的质量浓度,μgΠmL;V-样液定容体积,mL;m-样品量,g。2.2不确定度分量及其来源在本次测定中影响测定结果不确定度的因素主要为:1)被测试样品成分的不均匀性、不稳Ξ收稿日期:2006210218;修订日期:2006212206作者简介:刘翠平(1977-),女,工程师;E2mail:lcp@wz.ziq.gov.cn—96—第27卷第1期2008年1月分析试验室ChineseJournalofAnalysisLaboratoryVol.27.No.12008-1表1精密度实验结果(n=8)Tab.1Resultsofprecisionexperiments(n=8)2.3不确定度分量的评定2.3.1A类不确定度分量u(x)被测试样品成分的均匀性、稳定性以及方法的重复性的影响都用A类不确定度进行评定。取同一被测试样,在相同条件下测量8次,苏丹红的测定结果分别见表1。测定值wΠ(mgΠkg)序号苏丹红Ⅰ苏丹红Ⅱ苏丹红Ⅲ苏丹红Ⅳ12345678平均值0.400.410.410.410.420.420.420.420.410.390.410.380.410.370.350.390.360.380.350.350.350.370.350.370.370.370.360.530.490.520.460.520.490.470.520.501nΣ(x,¯x)2。测量结果取n次观测值的算ikn-1i=1术平均值时,xk所对应的A类不确定度用平均值样本标准偏差S(¯x)表示,u(x)=S(¯x)=S(xk)Πn。计算结果见表2。表2A类不确定度的评定中的量值(自由度υ=7)Tab.2ValuesoftheAkinduncertaintymeasurement(υ=7)S(xk)Π(mgΠkg)U(x)=S(¯x)苏丹红Ⅰ苏丹红Ⅱ苏丹红Ⅲ苏丹红Ⅳ苏丹红Ⅰ苏丹红Ⅱ苏丹红Ⅲ苏丹红Ⅳ0.007440.02190.01070.02620.002630.007750.003780.00925=2%Π(2×9110%)=0100550。标准物质称量值为10mg,用的是十万分之一天平,按照仪器说明书,其标准偏差为0102mg,则urel(mstd)=0102Π10=01002。标准溶液的稀释过程如下:将10mg标准物质溶解转移并定容至250mL容量瓶中得到标准贮备液,吸取标准贮备液011、012、014、018、116mL容至25mL容量瓶中得到标准系列溶液。该过程使用了一系列玻璃量具,按照常用玻璃量器检定规...