第35讲基因工程[考纲要求]1.基因工程的诞生(A)。2.基因工程的原理及技术(含PCR技术)(B)。3.基因工程的应用(B)。4.蛋白质工程(A)。5.转基因生物的安全性问题(A)。6.生物武器对人类的威胁(A)。考点一基因工程的操作工具1．基因工程的概念(1)供体：提供目的基因。(2)操作环境：体外。(3)操作水平：分子水平。(4)原理：基因重组。(5)受体：表达目的基因。(6)本质：性状在受体体内的表达。(7)优点：克服远缘杂交不亲和的障碍，定向改造生物的遗传性状。2．基因工程的工具(1)限制性核酸内切酶(简称：限制酶)①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。②作用：识别特定的脱氧核苷酸序列并切开特定部位的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。③结果：产生黏性末端或平口末端。(2)DNA连接酶①作用：将限制酶切割下来的DNA片段拼接成DNA分子。②DNA连接酶和限制酶的关系归纳提升与DNA相关的五种酶的比较名称作用部位作用结果限制酶磷酸二酯键将DNA切成两个片段DNA连接酶磷酸二酯键将两个DNA片段连接为一个DNA分子DNA聚合酶磷酸二酯键将单个脱氧核糖核苷酸依次连接到单链末端DNA(水解)酶磷酸二酯键将DNA片段水解为单个脱氧核糖核苷酸解旋酶碱基对之间的氢键将双链DNA分子局部解旋为单链(3)载体①种类：质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。②质粒的特点深化拓展载体上标记基因的作用载体上的标记基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要转入的受体细胞没有抵抗相关抗生素的能力。当含有抗生素抗性基因的载体进入受体细胞后，抗性基因在受体细胞内表达，使受体细胞能够抵抗相应抗生素，所以在受体细胞的培养体系中加入该种抗生素就可以只保留转入载体的受体细胞，原理如下图所示：1．有关工具酶的判断(1)限制酶只能用于切割目的基因(×)(2)切割质粒的限制性核酸内切酶均能特异性地识别6个核苷酸序列(×)(3)DNA连接酶能将两碱基间通过氢键连接起来(×)(4)E·coliDNA连接酶既可连接平口末端，又可连接黏性末端(×)(5)限制酶也可以识别和切割RNA(×)(6)限制性核酸内切酶、DNA连接酶和质粒是基因工程中常用的三种工具酶(×)2．有关载体的判断(1)载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因(×)(2)每个质粒DNA分子上至少含一个限制酶识别位点(√)(3)质粒是小型环状DNA分子，是基因工程常用的载体(√)(4)载体的作用是将携带的目的基因导入受体细胞中，使之稳定存在并表达(√)(5)外源DNA必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制(×)下图中的图1和图2分别表示的是EcoRⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶的作用示意图，据图分析：(1)请说出EcoRⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶识别的碱基序列及切割的位点。提示EcoRⅠ限制酶识别的碱基序列是GAATTC，切割位点在G和A之间；SmaⅠ限制酶识别的碱基序列是CCCGGG，切割位点在C和G之间。(2)以上实例说明限制酶有何特性？提示说明限制酶具有专一性(特异性)。命题点一工具酶的应用分析1．(2018·北京，5)用XhoⅠ和SalⅠ两种限制性核酸内切酶分别处理同一DNA片段，酶切位点及酶切产物分离结果如图。以下叙述不正确的是()A．图1中两种酶识别的核苷酸序列不同B．图2中酶切产物可用于构建重组DNAC．泳道①中是用SalⅠ处理得到的酶切产物D．图中被酶切的DNA片段是单链DNA答案D解析通过图1可知，两种限制性核酸内切酶切割DNA分子的不同部位，说明两种限制性核酸内切酶识别的核苷酸序列不同，A正确；图2中的酶切产物是DNA分子片段，可用于构建重组DNA，B正确；观察图1可知，该DNA片段有3个SalⅠ酶切位点，故用SalⅠ处理后，可形成4个DNA分子片段，电泳后出现4条电泳带，C正确；限制性核酸内切酶作用的是双链DNA片段，因此图中被酶切的DNA片段应是双链DNA，D错误。2．用限制酶EcoRⅤ单独切割某普通质粒，可产生14kb(1kb即1000个碱基对)的长链，而同时用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ联合切割该质粒，可得到三种长度的DNA片段，见下图(其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一个黏性末端)。若用MboⅠ限制酶单独切割该普通质粒，则产生的DNA片段的长度为()A．2.5和5.5B．2.5和6C．5.5和8D．6和8答案D解析依图示可知，该质粒上有1个EcoRⅤ限制酶的切点、2个MboⅠ限制酶的切点，故用限制酶Mbo...