罗汉果多糖提取工艺及组成分析李俊,黄锡山,陈海燕,张艳军,苏小建,何星存(广西师范大学环境与资源学院,广西桂林541004)摘要:研究了罗汉果多糖提取技术及单糖组成。采用水提醇沉法提取罗汉果多糖,通过石油醚脱脂、80%乙醇脱小分子糖,Sevag法去除游离蛋白,并用苯酚2硫酸法测定多糖含量。结果表明,罗汉果多糖浸提工艺的最佳条件是浸提温度80°C,料液比1∶30,浸提时间4h,浸提2次。硅胶薄层层析分析表明,罗汉果多糖由D2葡萄糖、D2半乳糖、D2木糖、L2阿拉伯糖、L2鼠李糖和葡萄糖醛酸组成。关键词:罗汉果;多糖;提取技术;组成:S66512文献标识码:A:100126600(2007)0120070204罗汉果(Siraitiagrosvenorii(Swingle)C.Jeffrey)是葫芦科(Cucurbitaceae)罗汉果属植物的成熟果实,主产于广西,是广西著名特产。罗汉果性凉味甘,无毒,有润肺止咳、清热解暑、凉血健胃、润肠通便的功效,在治疗咽喉炎、百日咳、急慢性气管炎、胃肠疾病方面疗效显著,被收载于中华人民共和国药典,作为常用中药使用1,卫生部、中医药管理局将其列入第一批“既是食品又是药品的品种名单”2。目前对罗汉果的研究主要集中在糖苷3～5。但罗汉果中除了糖苷外还含有大量的其他成分,如多糖(polysaccaride)等。罗汉果多糖具有抗癌、提高免疫、抗病毒、抗炎、降血糖、降血脂、抗氧化、抗衰老和促进骨折愈合等许多生物活性6,7。我们课题组也对罗汉果多糖进行了研究8,9,对其进行的初步药理试验表明,罗汉果多糖具有较好的免疫作用。因此对罗汉果多糖进行更深入的研究,能够帮助人们更好地开发利用罗汉果资源。本文对罗汉果多糖的提取工艺和化学组成进行探讨,利用水提醇沉法提取罗汉果多糖,探讨了浸提温度、时间、料液比等对罗汉果多糖提取率的影响,用正交试验寻找最佳提取工艺参数,并用硅1实验部分1.1材料、试剂与仪器罗汉果于2003年11月采自桂林市永福县,由广西师范大学生命科学学院李柏林博士鉴定,标本保存在广西师范大学环境与资源学院天然产物研究室。无水乙醇、石油醚、正丁醇、浓硫酸、苯酚、葡萄糖、三氟乙酸、冰醋酸、邻苯二甲酸、苯胺均为分析纯;薄层层析用硅胶(青岛海洋化工厂);D2葡萄糖、D2半乳糖、D2木糖、L2阿拉伯糖(上海试剂二厂);L2鼠李糖和葡萄糖醛酸均为生化试剂(Sigma公司)。FD21型冷冻干燥机(北京博医康技术公司);756CRT紫外可见光分光光度计(上海精密科学仪器有限公司分析仪器总厂)。1.2实验方法1.2.1罗汉果多糖提取工艺称取罗汉果干果500g,于70°C下真空干燥,破碎后,依试验设计要求,用热水浸提,抽滤,合并滤液并进行减压浓缩。在浓缩液中加入2倍体积的石油醚脱脂2次,滤出溶剂,残渣风干,以80%乙醇回流2次,每收稿日期:2006202220基金项目:广西科学基金资助项目(桂科基0575043);广西师范大学科研基金资助项目(2005年);药用资源化学与药物分子工程广西重点实验室资助课题(2006)作者简介:李俊(1964—),男,中山大学博士研究生,广西师范大学高级工程师。第1期李俊等:罗汉果多糖提取工艺及组成分析71V(正丁醇)=4∶1)混合液,振摇10min,在4000r·min-1下离心10min,分离除去沉淀,以上步骤重复5次以除去游离蛋白质。上清液以5倍体积95%乙醇沉淀2次,抽滤,固形物依次以丙酮、乙醚、无水乙醇洗涤,真空干燥,得罗汉果粗多糖30g。1.2.2多糖含量的测定标准曲线的制作:精密量取葡萄糖标准液(22.47mgƒL)0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.6,0.8,1.0mL,分别加到干燥的10mL磨口具塞试管中,再各加蒸馏水2mL,体积分数0.6%的苯酚溶液1.0mL,5mL浓H2SO4,摇匀,静置冷却至室温。取1mL蒸馏水,以浓硫酸为空白对照,480nm测吸光度,得回归方程:A=113.18Θ+0.7117,r=0.9993,式中,A为吸光度,Θ为葡萄糖质量浓度。吸取样品处理液1.0mL,置于10mL试管中,加水补足2.0mL,其他操作过程与标准曲线的制作相同,用回归方程计算多糖含量和多糖得率(%)。1.2.3罗汉果单糖组成分析罗汉果粗多糖按文献8的方法分离纯化得罗汉果多糖纯化物。称取纯罗汉果多糖10mg,溶于2.5mL2molƒLH2SO4中,封管于110°C水解6h。用BaCO3中和、离心、减压浓缩;取上清液浓缩后进行硅胶H薄板层析,以常见的各种单糖为对照。用乙酸乙酯2甲醇2醋酸2水(V(乙酸乙酯)∶V(甲醇)∶V(醋酸)∶V(水)=12∶3∶3∶2)于20°C下...