奥扎格雷钠对脑缺血再灌注后神经细胞保护作用［摘要］目的探讨奥扎格雷钠对大鼠脑缺血再灌注损伤的脑保护作用。方法采用Longas法制备大鼠脑缺血再灌注模型，分别用奥扎格雷钠(治疗组)和0.9%氯化钠注射液(对照组)腹腔注射。观察大鼠脑梗死体积、神经功能评分、细胞凋亡数和细胞凋亡率。结果治疗组比对照组大鼠脑梗死体积明显减小，神经凋亡数较对照组显著减少(P<0.01)o对照组神经功能评分为(2.83±0.75)分，治疗组为(1.83±0.75)分，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)o3组细胞凋亡率比较，差异有统计学意义(P<0.01)o结论奥扎格雷钠能明显减小脑缺血的梗死体积，减轻脑缺血再灌注后的神经损害，具有明显的脑保护作用。［关键词］奥扎格雷钠；脑缺血再灌注；神经细胞；凋、匸［中图分类号］R743［文献标识码］A［文章编号］1674-4721(2012)11(c)-0012-03急性缺血性脑损伤是非常复杂的病理生理过程，主要是缺血后能量代谢障碍。缺血性脑损伤是中枢神经系统功能受损的重要原因之一，是当前防治脑血管疾病的热点。奥扎格雷钠是一种特异性血栓A2(TXA2)合成酶抑制剂，能降低KinTXA2浓度，促进前列环素12（PGI2）的生成，并维持二者间的平衡，还能选择性地扩张血管，改善脑组织微循环和能量代谢，抗血小板聚集，有效地抑制血栓形成[1-3]o奥扎格雷钠目前已广泛用于治疗缺血性脑血管病，本研究采用大鼠脑缺血再灌注病理模型，观察奥扎格雷钠对脑缺血再灌注后神经细胞的保护作用，为临床应用提供理论依据。现报道如下：1材料与方法1.1材料健康雄性Wistar大鼠84只，质量210-270g,由山东省实验动物中心提供，随机分为盐水对照组（32只）、假手术组（20只）、奥扎格雷钠治疗组（32只），观察3组仅缺血90min（IR0h）和再灌注24h（IR24h）两个时段的神经细胞凋亡数和凋亡率。1.2方法大鼠脑缺血再灌注模型制作及给药采用LongaZ等[4]报道的方法进行改进，术中室温保持24°CO用大鼠大脑中动脉线栓法（MCA0）制备脑缺血再灌注大鼠模型，具体操作如T：用6%水合氯醛（0.4〜0.5mL/100g）腹腔内注射麻醉，离颈内外动脉，于颈外动脉切一小口，用插线插入至颈总动脉，并下拉，由分叉处插入颈内动脉，然后收紧活结，松开颈总动脉夹，抽出深处的细线，缝合切口。栓塞2h后进行长达12h的再灌注。假手术组仅分离双侧颈总动脉，不阻断血流［5］。脑缺血的大鼠麻醉清醒后，具备向左侧转弯，左前肢不能伸直为研究对象。假手术组大鼠栓子插入仅9伽。治疗组大鼠，于缺血前半小时和缺血后，分别向腹腔注射奥扎格雷钠水溶液（2mg/kg）取颈部正中切口,暴露颈总动脉,于其深处用细线穿住，分各一次，假手术组及对照组脑缺血大鼠，均在相同时间点，分别向腹腔注射等量的0.9%氯化钠注射液。1.3观察指标1.3.1神经功能评分0分：无神经损伤体征；1分：提尾时不能完全伸直对侧前爪；2分：行走时向外侧转圈；3分：站立时向对侧倾斜；4分：不能行走，意识丧失。1.3.2细胞凋亡测定在相应时间点，各组大鼠于评分后，分别取5只，麻醉处死。经枕骨大孔撑开颅骨，小心取处脑组织，迅速取出缺血边缘区新鲜脑组织50mg,置于575%£乙醇中处理，用流式细胞仪（FACS420,山东省肿瘤研究所）检测细胞凋亡率。细胞凋亡率二凋亡细胞数/细胞总数X100%o1.3.3脑梗死体积测定在预定时间点，治疗组和对照组各取6只大鼠，麻醉后断头处死，迅速取脑，置于冰箱中0.5h后，在额极后，每间隔2mm,连续取5个冠状脑切片,将切好的脑片立刻置于37*2%红四氮哩磷酸缓冲液中避光,恒温孵育30min,染色后，经10%多聚甲醛液固定24h后封片，用球积分析仪系统进行分析，计算出梗死体积［3］。1.4统计学方法采用SPSS17.0软件对所得数据进行统计分析，检测结果以均数土标准差表示，组间比较用t检验。2结果2.1各组大鼠脑梗死体积与神经功能评分比较奥扎格雷钠治疗组和对照组大鼠脑组织有缺血性的梗死灶，和MCA支配区域一致，奥扎格雷钠治疗组大鼠脑梗死体积为(107.9±12・1)mm3,明显小于对照组的(150.3±30.5)mm3(P<0.05)。假手术组大鼠肢体无神经损伤体征，神经功能评分正常。对照组大鼠脑神经功能评分为(2.83土0.75)分，奥扎格雷钠治疗组为(1・83土0・75)分，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)o见表1。