特异引物PCR快速检测可疑牙周致病菌相关性探究［摘要］目的：寻求快速检测伴放线放线杆菌(Aa)、牙龈吓咻菌(Pg)和中间普氏菌(Pi)在牙周感染患者人群中感染率的方法。方法：特异引物PCR,检测3种牙周可疑致病菌在30例中重度牙周病及30名正常组龈沟液中的定植情况。结果：PCR方法检出细菌的最低检测量为3.25ngoPg在中重度牙周病检出率86.7%,高于正常组13.3%,P<0.001oPi在中重度牙周病检出率为70%正常组为20%,P<0.001o伴放线放线杆菌在中重度牙周炎Aa检出率为6.7%,正常组检出率为3.3%,P>0.5o结论：PCR方法是特异性强，敏感性高的有效方法。Pg是成人牙周炎可疑致病菌。Pi是成人牙周炎可疑致病菌。Aa可能是牙周正常菌群一部分，需要大样本进一步检测。［关键词］牙周可疑致病菌；牙周病；PCR［中图分类号JR783［文献标识码］A［文章编号11008-6455(2011)02-0279-03Studyonthespecific-primerPCRdetectionof3speciesofputativeperiodontaipathogensandthecorrelationbetweenthepresenceofbacteriaandperiodontosisLIDa-xul,LIXiao-hongl,RENLe2,CHANGXiao-fengl(1.DepartmentofOralImpiant,AffiliatedStomatologyhospitonofXi'anJiaotongUniversity,Xi'an710003,Shaanxi,China；2.DepartmentofStomatology,TheFirstAffiliatedHosptialofcollegeofXi，anJiaotongUniversity)Abstract：ObjectiveToestablisharapidmultiplespecific-primerPCRfordetectionofthreespeciesofbacteriaAa,PiandPg,andthecorrelationbetweenthepresenceofbacteriaandtheperiodontosis・MethodsSubgingivalmicroflorasampleswerecollectedfrom30patientswithmoderatetoseverperiodotitisand30periodontallyhealthypatients,thePCRwasusedtoamplifythetargetgenes.ResultsSensitivityandspecificityofPCRwerealsoevaluatedwiththereferencebacteria.ThemultiplePCRwasabletodetectaminimumof3.25ngbacteriaDNA.Withgoodspecificity,targetfragmentsof3speciesofbacteriaweredetected.TheprevalenceofPginaduItsperiodentosiswere86.7%vs13.3%inthehealthygroup(P<0.001).TheprevalenceofPiinaduItsperiodentosiswere70%vs20%inthehealthygroup(PVO.001),TheprevalenceofAainaduItsperiodentosiswere6.7%vs3.3%inthehealthygroup(P>0.5).ConclusionAstheputativeperiodontalpathogensofaduItperiodontitis,Pg,Pi,Aaniaybepartofthenormaloralflora,thatneedfutherstudy.Keywords：putativeperiodontaipathogens；aduItperiodotitis；PCR细菌是牙周病的始动因子，但究竟哪些细菌与牙周病直接相关目前还没有确切的结论。细菌和牙周病临床表现的复杂性及各个实验室方法上的差异都可能导致主要可疑牙周致病菌检出上的差异，目前国外研究检出比较多的有牙龈吓咻菌(Porphyromonasgingivalis,Pg)、中间普氏菌(Prevotellaintermedia,Pi)、伴放线放线杆菌(A.actinomycetemcomitans,Aa)等。建立快速的检测方法研究细菌与牙周病的关系及作为牙周病预防和治疗监测的手段有非常重要的实际意义［1］。本研究旨在探讨应用PCR方法建立牙周可疑致病菌快速检测方法，并检验可疑致病菌与牙周病的相关性。1材料和方法1.1病例选择1.1.1牙周病组：选择30例成人慢性牙周炎(ACP)患者，年龄28〜65岁，全身无系统性疾病，半年内未做过牙周治疗，3个月内未服用过抗生素，根据常规Ilugoson法对上述病例进行分类，Hugoson法分为轻、中、重3类：①轻度：牙周袋深度^4mm,附着丧失W2mni,牙槽骨吸收为牙根长度W1/3,无牙松动；②中度：4mmV牙周袋深度W6mm,附着丧失3〜5mm,牙槽骨吸收为牙根长度W1/2,轻度牙松动；③重度：牙周袋深度＞6mni,牙槽骨吸收为牙根长度〉1/2,牙松动明显。30例均为中重度牙周病。1.1.2健康对照组：选择30例健康人群，牙周探诊深度＜3mm,牙龈出血指数(-)，菌斑指数＜2。，牙龈无红肿，半年内未做过牙周治疗，3个月内没有服用过抗生素。1.2实验菌株：PgATCC332777由首都医科大学口腔医院实验室提供。伴放线放线杆菌AaATCC29522,中间普氏菌PiATCC2561由第四军医大学口腔医院提供。1.3龈下细菌样本采集方法：①牙周病组：先用龈上洁治...