南酸枣内生细菌WYG5的鉴定及对芒果的防病效果南酸枣内生细菌WYG5的鉴定及对芒果的防病效果摘要：从南酸枣(Choerospondiasaxillaris)中分离到一株对芒果炭疽病菌拮抗作用较强的菌株WYG5,皿内拮抗活性达32%,通过形态观察、生理生化测定及16SrDNA序列分析，将该菌株鉴定为巨大芽泡杆菌(Baci1lusmegaterium),经测定该菌株发酵液及发酵滤液对采后芒果均有显著的保鲜防病效果，处理9d后的防效分别为60.76%和59.50%,12d后的防效分别为43.59%和34.19%。关键词：南酸枣；内生细菌；芒果炭疽病菌；防治效果:Q939.95文献标识码：A：0439-8114(2014)10-2398-03IdentificationofChoerospondiasaxillarisEndophyticBacterialStrainWYG5andItsEffectsonPreservatingPostharvestMangoWU激a—fei,LTXiao-yu,FANYong—inei,LTUZhi-qiang(CollegeofEnvironmentandPlantProtection,HainanUniversity,Haikou570228,China)Abstract：StrainWYG4,isolatedfromChoerospondiasaxillaris(Roxbl)BurttetHill,hadhigherantagonisticeffectsagainstColletotrichumgloeosporioides,withantagonisticactivityof32%inplate.Accordingtoitsmorphological,physiologicalandbiochemicalcharacter!sticsand16SrDNAsequence,thestrainWYG5wasidentifiedasBaci1lusmegaterium.Itsfermentationbrothandfermentationfiltratehadobviouseffectsonpreservatingpostharvestmango.After9dand12dtreatment,thecontrollingeffectswereupto60.76%,59.50%and43.59%,34.19%,respectively.Keywords：Choerospondiasaxillaris；endophyticbacteria；Colletotrichumgloeosporioides；controleffect基金项目：国家自然科学基金项目(31160377)；国家科技支撑计划项目(2012BAK01B05)南酸枣(Choerospondiasaxi1laris)为漆树科南酸枣属落叶大乔木，多年生，又名五眼果、酸枣树、山枣子等，主要分布于云南、广东、广西、湖南、湖北、江西、福建、浙江、贵州等地区［1］,其树皮和果实可以入药，树皮主治疮疡、汤火伤、阴囊湿疹；鲜果则消食滞，治食滞腹痛；果核醒酒解毒，治风毒起疙瘩成疮或疡痈［2］。植物内生菌是指在其生活史的一定阶段生活在活体植物组织内，而不引起植物明显病害的微生物［3］。许多研究表明植物中的内生细菌对宿主具有抗病促生的能力,作为生物菌剂在生物防治方面和促进植物生长方面有着重要的应用价值［4,5］。试验从南酸枣体内分离出一株内生细菌WYG5,发现其对芒果炭疽病菌具有较好的拮抗效果，利用常规方法结合16SrDNA序列分析对该菌株进行了鉴定，并测定了其对采后芒果的保鲜防病效果，为其今后应用奠定基础。1材料与方法1.1材料1.1.1供试材料南酸枣采自海南大学修州校区，内生细菌WYG5从南酸枣中经组织表面消毒分离获得。芒果炭疽病菌(ColletotrichumgloeosporioidesPenz)由海南大学环境与植物保护学院提供，芒果品种为台农1号。1.1.2培养基LB培养基：胰蛋白10g,酵母粉5g,NaCl10g,去离子水1L；PDA培养基：马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,去离子水1L。1.2方法1.2.1菌株培养菌株WYG5经活化后接入LB培养基，37°C、180r/min振荡培养2d,收集发酵液，12000r/min离心5min,将上清液利用0.22um的滤膜除菌过滤，得到发酵滤液。1.2.2菌株WYG5的鉴定采用常规鉴定方法进行［6］o菌株基因组DNA利用BacterialDNAKit(50)试剂盒提取,利用16SrDNA通用引物(5‘-AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3',5'-TAGGGTTACCTTGTTACGACTT-3')进行基因扩增，由上海英骏生物技术有限公司进行序列测定，将所测序列在GenBank中进行Blast分析，根据Blast结果利用MEGA5.0软件以邻近相接法构建系统进化树。1.2.3菌株WYG5皿内拮抗活性测定在直径9cm的PDA平板中央接种1块直径为5nini芒果炭疽病菌的菌饼，菌丝面朝下，同时在菌饼两侧2cm处各接入一环内生细菌WYG5,以不接内生细菌为对照，每处理3次重复，28°C培养2〜3d,十字交叉法计算皿内拮抗活性。1.2.4菌株WYG5对芒果的防病效果取健康无病、大小均一、约八成熟芒果果实，用75%酒精表面消毒后，自然晾干备用。处理液包括发酵液、10倍稀释发酵液、发酵滤液、10倍稀释发酵滤液，以去离子水处理为对照。处理时将果实分别于...