多菌灵降解菌的构建及对烟叶残留降解效果评价陈芊如余佳敏胡希好苟春苗丁蓬勃荆常亮杨英杰李斌李义强摘要：为控制烟叶中多菌灵农药残留，利用降解酶基因质粒载体克隆技术，合成构建了对多菌灵具有较好降解效果的菌株MBC2019，并进一步筛选优化了其发酵条件和最佳浓度，研究了降解菌在烟叶种植、烘烤和打叶复烤阶段对烟叶多菌灵农药残留降解的效果。结果表明，降解菌的最佳培养温度为28℃，最适培养pH为7.0，最优接种浓度为3.00%。种植阶段，喷施多菌灵和降解菌后3～7d，未喷施降解菌烟叶中农药残留降解速度快于降解菌处理，14d后降解菌的促进效果开始显现，未使用降解菌的降解率为96.55%，使用降解菌的降解率提高到99.58%;在烘烤和打叶复烤阶段，未使用降解菌的烟叶中多菌灵降解较慢，120h降解率为8.07%和8.05%，喷施降解菌后，同期降解率分别达到77.97%和45.08%。因此该降解菌可用于烟叶种植，特别是烘烤和打叶复烤等阶段的多菌灵农药残留降解，具有良好的应用前景。关键词：多菌灵;农药残留;烟叶种植;烘烤;打叶复烤;微生物降解Abstract：Inordertocontrolcarbendazimpesticideresiduesintobaccoleaves，thestrainMBC2019withgooddegradationeffectoncarbendazimwassynthesizedandconstructedbyusingthecloningtechnologyofdegradationenzymegeneplasmidvector.Thefermentationconditionsandoptimalconcentrationwerescreenedandoptimized，andthedegradationeffectsofcarbendazimpesticideresiduesintobaccoleavesduringplantingandcuringandredryingwereevaluated.Theresultswereasfollows：thedegradationbacteriawassuccessfullysynthesizedandconstructed，theoptimalculturetemperaturewas28℃andpHwas7.0，andthebestinoculationconcentrationwas3.00%.Inthefieldconditions，thepesticideresiduesintobaccoleavesweredegradedrapidlyduetophotolysis，growthdilution，microbialdegradationandotherfactorsin3-7days.Thedegradation-promotingeffectofdegradingbacteriabegantoappear14dayslater.Atthispoint，thedegradationrateswere96.55%withoutapplicationand99.58%withapplicationintobaccoleaves.Duringcuringandredryingstages，thecarbendazimdegradationrateswere8.07%and8.05%withoutapplication，differingfromthedegradationratesof77.97%and45.08%withapplicationat120h.Thedegradationbacteriacouldbeusedtodegradecarbendazimresiduesintobaccoleavesatdifferentstages，especiallyatthecuringandredryingstages，whichshowedagoodapplicationprospect.Keywords：carbendazim;pesticideresidues;tobaccoplanting;curing;redrying;microbialdegradation多菌靈作为一种内吸性杀菌剂，具有高效、低毒、广谱的特点，对农作物的白粉病、根黑腐病、赤星病等[1]有较好的防治效果，在农作物生产中使用普遍，烟叶样品中多菌灵农药残留检出率高，对烟叶的品质与安全有较大影响[2]。目前烟叶中多菌灵农药残留量限量值为2mg/kg，被作为一类风险农药管理[3]。为进一步明确多菌灵农药残留的形成机理与降解对策，国内外专家针对烟叶中多菌灵残留展开了一系列研究[4]，明确了其在烟叶冻干、杀青过程中的降解规律和有效降解方式。由于微生物降解范围广、代谢方式丰富多样，通过筛选农药降解微生物来降低烟叶中的农药残留，是一种成本低廉、无毒无害的方法[7]。目前，已经报道的多菌灵降解菌有红球菌属（Rhodococcus）[6]、芽孢杆菌属（Bacillus）[8]、罗尔斯通氏菌属（Ralstonia），以及假单胞菌属（Pseudomonas）[9]等。然而天然菌株代谢产物复杂多样，可能对环境及人畜安全造成威胁，且培养条件复杂、生长较慢，容易导致产酶不足、降解效果不佳等问题。为了解决以上问题，本研究将特异性多菌灵降解酶基因与遗传背景清楚、安全无威胁、不具备多菌灵降解功能的天然菌株相结合，利用基因质粒载体克隆技术进行多菌灵降解工程菌的构建，并进一步优化了其培养条件，开展了在烟叶种植阶段、烘烤阶段和打叶复烤阶段，降解菌对烟叶中多菌灵降解效果的研究评价，为开发降解烤烟中多...