哮喘大鼠肺组织Akt蛋白表达上调对IL-4,IL-12和IL-的影响

哮喘大鼠肺组织Akt蛋白表达上调对IL-4,IL-12和IL-13的影响作者:徐慧,戴元荣,夏晓东,吴成云,何建波【摘要】目的:研究Akt蛋白对支气管哮喘大鼠IL-4,IL-12和IL-13表达的影响。方法:雄性SD大鼠24只,随机分为3组:对照组(C组)、哮喘组(A组)、渥曼宁青霉素组(Wortmannin,W组),每组8只。以卵白蛋白(OVA)致敏和激发建立大鼠哮喘模型。各组大鼠于末次激发后24h,放血处死。酶联免疫吸附试验(ELISA)测定BALF中IL-4,IL-13和IL-12的浓度;免疫组化法测定肺组织中p-Akt蛋白的表达;Westernblot测定肺组织匀浆中p-Akt蛋白的含量。结果:A组p-Akt蛋白的表达明显高于C组,W组p-Akt蛋白的表达低于A组,但仍高于C组;BALF中IL-4,IL-13的含量A组明显高于C组,W组IL-4,IL-13的含量低于A组,但仍高于C组,BALF中IL-12的含量A组明显低于C组,W组IL-12的含量低于C组,但仍高于A组。结论:哮喘大鼠模型中出现了Akt蛋白的激活,细胞因子失衡可能与Akt蛋白的激活有关。【关键词】哮喘;细胞因子;磷脂酰肌醇3激酶;蛋白激酶BAbstract:Objective:TostudytheeffectofproteinAktinasthmaairwayinflammationofasthmaticratsonthecytokineIL-4,IL-13andIL-12.Methods:Twenty-fourmaleadultSprague-Dawley(SD)ratswererandomlydividedintothecontrolgroup(C),theasthmagroup(A)andWortmanningroup(W).Therats’asthmamodelswereestablished,inwhichratsweresensitizedwithOVAandAl(OH)3,andrepeatedlyexposedtoaerosolizedovalbumin.Theratsweresacrificedat24hoursaferlastchallege,MeanwhiletheconcentrationofIL-4,IL-13andIL-12inBALFweremeasuredwithELISA.Theexpressionsofp-AktproteinweredetectedwithImmuno-histochemistry(IHC).Thelevelofp-AktinlunghomogenatewasmeasuredwithWesternblot.Results:Theexpressionsofp-AktproteinoflungtissuesinthegroupAwerehigherthanthoseingroupC,andtheexpressionsofp-AktproteinofgroupWwerelowerthanthatofgroupA,buthigherthanthatofgroupC.TheconcentrationofIL-4andIL-13inBALFofgroupAweresignificantlyhigherthanthatofgroupCandthoseofgroupWwerelowerthanthoseofgroupAbuthigherthanthoseofgroupC.TheconcentrationofIL-12inBALFofgroupAwassignificantlylowerthanthatofgroupCandthatofgroupWwaslowerthanthatofgroupC,buthigherthanthatofgroupA.Conclusion:TheproteinAktisactivatedintheasthmaticratsmodel,andtheimbalanceofcytokineandtheairwayinflammationintheasthmaticratsmodelmaybe---本文于网络,仅供参考,勿照抄,如有侵权请联系删除---regulatedbyactivationofAkt.Keywords:asthma;cytokine;PI3K;PKB/Akt细胞因子是参与非特异性免疫反应、炎症反应的一组小分子多肽和糖蛋白。细胞因子网络失衡可能是哮喘发病的分子生物学基础之一,Th2优势应答是哮喘发病的始动和维持因素。哮喘患者体内存在的受体信号转导机制调控着细胞因子、黏附分子和炎性递质对机体的作用。目前的研究认为,PI3K/Akt信号传导途径在哮喘发生、发展中起了重要作用。本实验建立大鼠哮喘模型,测定肺组织中p-Akt蛋白的表达及肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid,BALF)中IL-4,IL-12和IL-13的浓度,进一步明确哮喘的发病机制,为寻找更有针对性的治疗方法提供依据。1材料和方法1.1动物分组及模型的建立SPF级雄性SD(Sprague-Dawlay)大鼠32只,由温州医学院实验动物中心提供(SYXK(浙)2005-0061),6~8周龄,体重(200±10)g,随机分为对照组(C组)、哮喘组(A组)和渥曼宁青霉素组(Wortmannin,W组),每组8只。A组和W组参照Temelkovski等[1]的方法建立哮喘模型,每日激发哮喘1次,共8周。C组雾化吸入生理盐水,W组在模型组基础上,每次激发前半小时以Wortmannin15μg/kg腹腔注射。1.2标本的采集与制备各组大鼠分别于末次激发后24h内,10%水合氯醛溶液(5mL/kg)腹腔麻醉,打开胸腔,分离肺组织,结扎左支气管,行右支气管灌洗,用10mL的生理盐水分3次注入,并轻轻按摩肺组织,约30s后回收BALF,回收率高于80%,回收液3000r/min离心1...

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