血小板源生长因子可促进低氧的牛肺动脉平滑肌细胞核内NF-κB表达关键词：血小板源生长因子；过氧化氢；NF-κB；肺动脉；肌，平滑中国病理生理杂志000513[摘要]目的：为探讨血小板源生长因子(platelet-derivedgrowthfactor,PDGF)受体信号转导途径的介质分子之一过氧化氢(H2O2)在低氧的肺动脉平滑肌细胞(pulmonaryarterysmoothmusclecell,PASMC)增殖中是否起作用。方法：应用共聚焦显微镜、细胞免疫组织化学及Western印迹杂交等方法，检测了低氧的PASMCPDGF受体途径中的H2O2的变化及PDGF和H2O2对细胞核内与增殖作用相关的核转录因子NF-κB表达量的影响。结果：PDGF可使常氧的PASMC中H2O2浓度增高，但明显降低低氧的PASMC中H2O2的量；同一浓度的H2O2，作用于常氧的PASMC，则引起核NF-κB的表达量增加，但对低氧的PASMC核NF-κB有明显的抑制作用；同时加入PDGF和H2O2的低氧的PASMC较仅以H2O2作用的低氧的PASMC，核NF-κB的量显著增加。结论：PDGF受体的信号转导途径在低氧的PASMC同常氧的PASMC相反，H2O2为抑制因子，对细胞可能产生损伤作用，PDGF可抑制低氧的PASMC产生H2O2并达到促进NF-κB表达增强的目的，从而使胞内与增殖相关的基因表达增强，最终达到低氧条件下表达增强的PDGF对低氧性PASMC过度增殖的正反馈调节作用。[中分类号]Q786[文献标识码]A[]1000-4718(2000)05-0428-04Platelet-derivedgrowthfactorstimulatetheincreaseofNF-κBexpressioninthenucleiofhypoxicbovinepulmonaryarterysmoothmusclecellsHUANGQun-hua,SUNRen-yu(InstituteofBasicMedicalSciences,CAMSPUMC,Bei激ng100005,China)[Abstract]AIM:TorevealwhetherH2O2,akindofplatelet-derivedgrowthfactor(PDGF)signalingmolecule,involvedintheproliferationofhypoxicpulmonaryarterysmoothmusclecells(PASMCs)andexpressionoftranscriptionfactorNF-κB.METHODS:Laserconfocalscanningmicroscopy,immunocytochemistryandWesternblotanalysiswereused.RESULTS:PDGF(30ng/mL)elevatedtheintracellularH2O2innormoxicPASMCs,butdecreasedthatofhypoxicPASMCssignificantly.When100μmol/LH2O2wasadded,NF-κBexpressionwereinhibitedmarkedlyinhypoxicPASMCs,whilethesameconcentrationH2O2resultedinincreaseofNF-κBexpressionincontrolcells.CONCLUSION:H2O2,amediatormoleculeofPDGFsignaltransduction,actasaninhibitorinhypoxicPASMCswhichisquietdifferentfromthatinnormoxicPASMCs.ItmayeffectontheexpressionoftranscriptionfactorNF-κB.NF-κBinducevariousgeneexpressionthatinvolvingintheproliferationofvascularsmoothmusclecells.OnemechanismbywhichPDGF-inducedhypoxicPASMCproliferationmightbethroughPDGFalleviatingH2O2inhibition.[MeSH]Platelet-derivedgrowthfactor;Hydrogenperoxide;NF-kappaB;Pulmonaryartery;Muscle，smoothH2O2为血管平滑肌细胞血小板源生长因子(PDGF)受体信号转导途径中的介质之一，且特异性地增强血管平滑肌细胞DNA的合成，促进细胞增殖[1～2]。我们以往的实验结果显示，低氧性肺血管平滑肌细胞增殖作用与PDGF及其受体的表达增强有关[3]，未见报道H2O2是否参与此作用。本实验通过观察PDGF对低氧的肺动脉平滑肌细胞H2O2的影响以及PDGF---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---和H2O2两者对核转录因子NF-κB表达的影响，进一步明确了受体途径中的有关作用环节。材料和方法一、肺动脉平滑肌细胞(PASMC)贴块法培养及传代新生乳牛(北郊农场)开胸后，无菌取肺外肺动脉，洗净，浸入D-Hanks液中，冰浴带回实验室。在超净工作台内，将肺动脉置于平皿中，剪开血管腔，轻刮去内膜面的内皮细胞，并平行划开内膜面浅层，用小手术镊撕下内膜平滑肌层，按贴块法进行细胞原代培养。培养液为含10%胎牛血清的DMEM。待8～10d后，观察到组织块周缘滋长出的PASMC已铺满组织块周围，用0.25%胰酶消化传代。实验用3～6代细胞。二、细胞低氧模型的复制采用自制的缺氧小室复制低氧模型。12h低氧组细胞(H)置于缺氧小室中。可通过气体流量控制阀将...