大肠埃希菌噬菌体的分离鉴定及其生物学特性研究-----------------------------孙荣炉、，李菁％,史红梅，，孙延波…，关显智、，徐德启------------------（1.吉林人学白求恩阪学院病原生物学教研室，吉林长奍130021;2.美W食品药品宵理局肠道和件传播疾病丈验室）=摘要＞目的通过分离鉴定大肠埃希阱噬闲体，研究其虫物学特性、方法利用噬函斑法从环境污水中分离和鉴定大肠埃希菌噬歯体，采川负染法电镜观察噬歯体的形态和大小;捉取噬谢体的基W织并进行嗨切电泳分析，测定噬谢体感染釔数并观察其一步生长曲线。结果通过噬蘭斑法分离出9株大肠埃希萷噬阐体。电镜显示，噬蘭体尖部呈立体对称，有一长尾。琼脂糖凝胶电泳显示，噬闹体基因组人小约30kb。生长曲线表明噬阐体感染宿主蘭的潜伏期为23min,爆发时间为39min,裂解跫为78（结论9株大肠埃希菌噬菌体中有6株具有较广的噬歯潸，潜伏期短，裂解量明显，为深入研究大肠埃希菌噬歯体的生物学特性及艽功能提供了依裾，=关键词＞大肠埃希陴;噬阱体;感染复数;生物学特征=＞R378.21=文献标识码＞A=〉1673-5234（2009）02-0088-03[JournalofPathogenBiology.2009Feb;4(2):88-90,104.]IdentificationandbiologicalpropertiesofEscherichiacoliphagesisolatedfromrawsewage11112(l.De-1partmentofMicrobiologyrNormanBethuneSchoolofMedicinejilinUniversity,Changchun130021,China;2•La-boratoryofEntericandSexuallyTransmittedDiseases,FoodandDrugAdministration,USA)=Abstract>ObjectiveToinvestigatebioIogicaIpropertiesofphages,EscherichiacoliphageswereisolatedfromrawW村eRo吻thWsa(Siaaatr鉍•ranvnahfn?phageswascar-riedouttoobservethemorphologyandsizeofE.coliphagebynegative-staining.TheextractionofphagegenomeandtheelectrophoresisofDNAwereperformed.Multiplicityofinfectionandgrowthcurveofphagesweredetermined.ResultsNinestrainsofE.coliphageswereidentified.ElectronmicrographicsshowedthatE.coliphagesexhibitacubicsym-metry,andthesephageshaveaIongtail.ElectrophoresisofDNAdemonstratedthatthesizeofphagegenomeswasa-round30kb.Thegrowthcurveshowedthattheincubationperiodwas23min,thetimeofburstphasewas39min,andtheburstsizewas78.ConclusionSixstrainsofphageshaveaabroadhostrangeinE.colizashorterincubationper-iod,andaapparentburstsize.ThesedataenableustoexploremorepropertiesofE.coli.=Keywords>Escherichiacoli;phages;multiplicityofinfection;biologicalproperties噬尚体是一类感染细尚、放线蔺、真尚等微生物的病毐，体积微小，结构简单，具打严格的寄生性，广泛分布于B然界屮。根据噬菌体与怙主菌的关系讨分为裂解性噬苘体和溶原性噬菌体。鉴于噬菌体冇溶菌作用和严格的种及型特异性，可利川噬谢体作细谢的鉴记和分型，亦可用于检测标本中的未知细菌和防治某些传染病。人肠埃希菌可引起局部感染（泌尿系感染）或全身感染（败血症），是医院rt感染的巫要病原菌之一。巾于长期滥用抗生素，耐药菌株不断出现，给临床治疗带來一记W难。而噬蘭体作为一种新的治疗制剂已受到广泛关注［11。木实验R在通过分离大肠埃希菌噬菌体，研究其生物学特性，为噬菌体作为一种生物制剂用于治疗细菌性感染提供实验依据。'材料与方法1材料l.i菌株大肠坎希菌20株,巾吉林大学屮n联谊医院分离鉴定，本实验室保存。1.2试剂LB培养基按文献［2］配制;齊通背养琼脂（上海新兴化工试剂研究所）；PEG8000（长畚ii/天佳生物技术有限公司；DNase门、RNaseA（Sigma公司）；逛白醜K（Amresco公口1）;氯仿（北京化工j）;平衡酚（BioFlux公司）;EcoRN（TOYOBO公司）；Hind6（TOYOBO公司）。2方法2.1噬菌体的分离、纯化及滴度测定参照文献［3］,取居民区下水道污水3L，加入固体CaCk至终浓度1mmo1/L,5000g离心10min,过滤除菌。取液体1L,加20株新鲜培养的大肠埃希菌悬液各1mI和LB'=基金项目＞吉林大学科技创新资助项!No.2007C71277）,°=通讯作者＞E-mail:sunyb@jlu.edu=作者简介＞孙荣华（1972-）,女（汉族），吉林...