肿瘤学专业毕业论文[精品论文]抗骨桥蛋白单克隆抗体在ConA诱导的自身免疫性肝炎中的治疗机制及其人源化构建关键词：单克隆抗体自身免疫性肝炎细胞凋亡抗体治疗摘要：自身免疫性肝炎的发病主要是由T细胞介导，自身免疫系统攻击肝脏引起炎症和肝细胞坏死，但其病因和发病机制尚未完全弄清楚。刀豆蛋A(ConcanavalinA，ConA)诱发的小鼠特异性肝损伤，主要表现为伴随大量淋巴细胞侵润的肝细胞损害。研究表明大量的促炎细胞因子、趋化因子与趋化因子受体和共刺激信号分子等参与了发病过程。该模型很好地模拟了人类的肝脏免疫炎症性疾病，它的建立和应用为深入研究肝细胞损害的细胞学与分子学机制以及进行治疗药物筛选提供了更为方便和理想的实验动物模型。在ConA诱导的肝炎模型中，能检测到血浆中的OPN表达水平明显升高。研究证明疾病发生过程中升高的OPN主要来自于NKT细胞，且以天然和凝血酶酶切OPN的形式同时存在并发挥作用。而且OPN通过SVVYGLR功能序列与NKT和T细胞上的α4、α9、β1、β3相互作用，进一步放大NKT细胞的激活作用并上调巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)的分泌表达，触发中性粒细胞浸润及活化。OPN及NKT缺陷小鼠能抵抗ConA诱导的肝炎。这些研究结果都表明OPN在OPN分子在自身免疫性肝炎的发病中发挥重要的作用。在本研究中，我们制备了两株小鼠抗人OPN抗体(23C3和F8E11)，体外理化性质研究表明，这两株抗体与小鼠OPN具有交叉反应性。体外功能实验发现，23C3和F8E11均能有效的抑制活化淋巴细胞的迁移，并且具有剂量依赖性。23C3和FSE11所识别的表位“WLNPDP”和“QLYNKYP”在OPN所诱导的淋巴细胞迁移和存活过程中发挥着重要的作用，是OPN的分子上的两个新的功能表位。为了进一步考察它们的体内功能，我们建立了ConA诱导的小鼠急性肝炎模型。我们发现应用抗OPN单抗大大的提高了致死剂量ConA诱导的肝衰竭的小鼠存活率；在亚致死剂量ConA诱导急性肝炎中，同样也发现抗OPN单抗能够有效的降低血浆中AST和ALT的水平；病理学检查也表明抗OPN单抗处理小鼠的肝脏组织中，肝细胞的坏死程度和炎症细胞浸润程度明显低于对照组，23C3单抗治疗组效果尤为明显。细胞因子水平，如TNF-α、IL-1β和IL-6，在抗OPN单抗处理后也被有效的降低。进一步的检测肝组织中转录因子NF-κB的活性，我们发现抗OPN单抗有效的抑制了NF-κB的活化。因此上述结果表明，应用抗OPN单抗在ConA诱导的小鼠急性肝炎中依然有效，而且其治疗机制可能与抑制了NF-κB的活化，降低了炎症细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的水平相关。我们又对这两株抗体的治疗机理进行了深入的探讨，发现23C3单抗能够有效的促进小鼠的活化淋巴细胞的凋亡，尤其是CD4+T细胞，而且这种作用不依赖于Caspase途径；相反地，F8E11单抗不具备该作用。通过Immunoblot分析，我们发现23C3能够显著的上调Bcl-2水平，下调Bim和Bax的水平；同时也发现23C3明显的抑制了NF-κB的活性。这些结果有力的提示我们OPN单抗可以通过调控淋巴细胞存活和调亡的信号通路，诱导活化淋巴细胞的调亡，从而达到有效治疗小鼠自身免疫性肝炎的目的。在此基础上，克隆了23C3的可变区基因，利用CDR移植法构建了23C3的人源化抗体，通过计算机辅助下的同原建模，确立了影响亲和力的7个氨基酸残基L1Tyr，L45Gln，L48Val，L70Gln，H30Asn，H49Ala，H93Val，并加以回复突变，获得亲和力与人鼠嵌合抗体相近的抗OPN人源化抗体h23C3。体外实验证实h23C3能够有效地抑制OPN诱导地淋巴细胞地迁移和存活。对该抗体的进一步研---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---究将有助于其对自身免疫性疾病的临床应用。---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---正文内容自身免疫性肝炎的发病主要是由T细胞介导，自身免疫系统攻击肝脏引起炎症和肝细胞坏死，但其病因和发病机制尚未完全弄清楚。刀豆蛋A(ConcanavalinA，ConA)诱发的小鼠特异性肝损伤，主要表现为伴随大量淋巴细胞侵润的肝细胞损害。研究表明大量的促炎细胞因子、趋化因子与趋化因子受体和共刺激信号分子等参与了发病过程。该模型很好地模拟了人类的肝脏免疫炎症...